您当前的位置:
首页 > 文献资料
所属专业:
HEK-293T 细胞文献资料
-
人长链非编码RNA基因H19克隆、表达载体构建及对MCF-7细胞增殖的影响
目的:克隆人长链非编码 RNA H19基因,构建表达载体,研究 H19表达对 MCF-7增殖的影响作用。方法制备乳腺癌 MCF-7细胞总 RNA,RT-PCR 扩增长链非编码 RNA H19全长序列,分子克隆至 pcDNA3.1(-)真核表达载体;分别转染 HEK-293T 和 COS 7细胞并行 Real-time qPCR 验证载体构建是否成功;转染 H19表达载体入 MCF-7细胞株,转染0、24和48 h 后行 MTS 检测 H19表达,同时设计 siRNA 小分子片段干扰 H19的表达,观察对 MCF-7细胞增殖活性的影响。结果成功克隆和构建了 hH19-pcDNA3.1(-)表达载体;转染入 MCF-7细胞48h 后,H19过表达,MTS 检测 H19表达载体组吸光度明显高于空载体组和空白对照组;而转染H19 siRNA 小分子片段后能干扰其表达,同时抑制细胞增殖。结论H19过表达能够促进乳腺癌 MCF-7细胞增殖。