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广西眼镜蛇毒中血管紧张素转换酶抑制剂的分离纯化及鉴定
血管紧张素转换酶抑制剂(angiotensin converting enzyme inhibitor,ACEI)是存在于多种蛇毒中的活性多肽,对心血管系统和血液系统的作用早已为人们所注意.本研究采用蛋白液相色谱法,经凝胶过滤及离子交换柱层析从广西眼镜蛇毒中分离纯化得到电泳纯的ACEI,并对其部分生物活性及对自发性高血压大鼠(SHR)血压的影响进行研究.
关键词： 广西眼镜蛇毒 分离纯化 血管紧张素转换酶抑制剂 生物学活性 降血压 -
广西眼镜蛇毒 Natrin 对人卵巢癌 SKOV3细胞凋亡的影响
目的：观察广西眼镜蛇毒Natrin对人卵巢癌SKOV3细胞凋亡的影响。方法将对数生长期的SKOV3细胞分为两组，观察组加入不同终浓度的Natrin，对照组加入等体积培养液。处理24 h后，采用MTT法检测细胞生长抑制率，流式细胞术检测凋亡率，透射电镜下观察细胞凋亡形态。结果1．25、6．25、12．5、62．5、125、200、250 mg/L的Natrin作用SKOV3细胞24 h生长抑制率分别为13．24％±0．01％、22．60％±0．01％、47．94％±0．01％、67．73％±0．01％、80．21％±0．03％、87．88％±0．01％、88．94％±0．01％，不同浓度间比较，P均＜0．01。观察组凋亡率高于对照组，P均＜0．01；观察组随着Natrin浓度增加，早、晚期和总凋亡率逐渐增大，早期凋亡率均高于晚期凋亡率，P均＜0．01。观察组电镜下细胞出现典型的凋亡形态。结论 Natrin能明显抑制人卵巢癌SKOV3细胞生长并促进其凋亡，且呈剂量依赖性，其诱导SKOV3细胞发生早期凋亡的作用高于晚期。
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眼镜蛇毒神经生长因子诱导人鼻咽癌CNE-2细胞凋亡作用的研究
目的:研究广西眼镜蛇毒神经生长因子(Nerve growth factor,NGF)对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖的抑制作用和诱导细胞凋亡.方法:应用三磷酸腺苷-生物荧光肿瘤化疗药物敏感试验法(ATP-TCA法)测定不同质量浓度(0.0125,0.025,0.05,0.1,0.2 g·L)NGF处理24,48,72,96 h对人鼻咽癌CNE-2生长的抑制率;Hoechst 33342荧光染色观察凋亡细胞的形态;琼脂糖凝胶电泳测定DNA断裂状况;流式细胞术检测细胞周期变化和细胞凋亡率.结果:不同浓度的NGF能抑制CNE-2细胞增殖,并呈浓度-时间效应关系,作用24,48,72,96 h的半数抑制浓度(IC50)分别为0.213,0.095,0.048,0.033 g·L-1;经NGF(0.1 g·L-1)处理细胞48 h后,荧光染色呈现典型的细胞凋亡形态学特征;DNA凝胶电泳可见凋亡细胞特有的DNA片段;0.05.0.1,0.2 g·L-1NGF作用48 h后,CNE-2细胞被阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率分别为(28.2±2.0)%、(39.9±1.9)%、(50.3±1.3)%.结论:NGF通过诱导人鼻咽癌CNE-2细胞凋亡而产生抗鼻咽癌活性.
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广西眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶体内外抗血小板聚集实验研究
目的 研究广西眼镜蛇中提取的L-氨基酸氧化酶(L-amino acid oxidase)在人体外及家兔体内的抗血小板聚集作用.方法 用比浊法测定广西眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶对二磷酸腺苷(ADP)、胶原、凝血酶、花生四烯酸(AA)在人体外及家兔体内引起的血小板聚集率的影响.结果 实验中,能明显抑制二磷酸腺苷(ADP)、胶原、凝血酶、花生四烯酸(AA)引起的血小板聚集,并呈明显的正相关.结论 广西眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶在体内外均有较强的抗血小板聚集活性.
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广西眼镜蛇毒中Natrin蛋白的分离及纯化
目的:从广西眼镜蛇毒中分离出Natrin蛋白.方法:广西眼镜蛇毒经SephadexG75凝胶、CM Sepharose CL-6B离子交换层析及FPLC mono-S柱层析分离纯化出Natrin蛋白.结果:从广西眼镜蛇蛇毒中分离纯化得到的Natrin蛋白,经SDS-PAGE电泳测定其分子量为25 ku,质谱测定其分子量为24.937 ku,测得其N端的序列为NVDFNSESTRRKKKQKEIVD,C端的序列为NIKK.结论:从广西眼镜蛇毒中分离出纯的Natrin蛋白组分.
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广西眼镜蛇毒中降压因子对自发性高血压模型大鼠血压的影响
目的:研究从广西眼镜蛇毒中分离纯化得到的降压因子(HF)对自发性高血压模型大鼠(SHR)血压的影响.方法:将SHR和正常大鼠各随机分为空白对照组、卡托普利组及HF低、中、高3个剂量组(40、80、160μg·kg-1)共5组(n=6),静脉注射相应试药,采用BL-420生物信号分析系统测定大鼠收缩压.结果:静脉注射不同剂量的HF均能降低SHR和正常大鼠收缩压,低、中、高3个剂量组的大降压值分别为20.9、23.91、30.58mmHg,与给药前比较均具有显著性差异(P＜0.01).结论:广西眼镜蛇毒中HF对SHR和正常大鼠有明显的降血压作用.
