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神经生长因子对H9 c2心肌细胞缺氧/复氧后凋亡的保护作用及其机制
目的：探讨神经生长因子( NGF)对H9c2心肌细胞缺氧/复氧( H/R)后凋亡的保护作用及其机制。方法将培养的H9 c2心肌细胞随机分为5组：正常对照组( C组)、缺氧/复氧组(H/R组)、NGF组(N组)、NGF+PI3k受体特异性阻断剂LY294002组( N+L组)和LY294002组( L组)。 C组用正常培养液在通有95%空气+5% CO2的37℃培养箱内正常培养8 h；H/R组用预先经95% N2+5% CO2的混合气饱和1 h的模拟缺氧液置换正常培养液后,放入通有95% N2+5% CO2的37℃培养箱缺氧培养4 h,然后将模拟缺氧液换用预先经95%空气+5% CO2饱和的正常培养液,在正常条件下复氧4 h；N组、N+L组和L组先缺氧培养4 h(缺氧条件同H/R组),再分别用预先经95%空气+5% CO2饱和的含NGF、NGF+LY294002和LY294002的正常培养液置换模拟缺氧液,在正常条件下复氧4 h。 NGF和LY294002的终浓度分别为0.05 mg·L-1和3 mg·L-1。 CCK-8比色法测定各组细胞的存活率；应用碘化丙啶( PI)染色流式细胞术检测细胞凋亡率；Western blot法检测胞内Akt磷酸化水平及内质网应激蛋白Caspase-12蛋白的表达。结果 N组与N+L组或H/R组或L组相比能明显提高H9 c2心肌细胞经H/R损伤后的存活率,减少细胞凋亡率,上调Akt磷酸化水平,降低内质网应激蛋白Caspase-12表达；LY294002明显抑制了NGF对Akt磷酸化水平的上调作用。结论 NGF对经H/R损伤的 H9 c2心肌细胞有抗凋亡作用,其机制可能与PI3k-Akt通路有关。
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吡那地尔、美托洛尔、谷氨酰胺、胰岛素单独及联合使用对H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤的抗凋亡作用及机制
目的 研究吡那地尔(pinacidil,Pin)、美托洛尔(metoprolol,Met)、谷氨酰胺(glutamine,Glu)、胰岛素(insulin,Ins)4药联用对缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)所致H9c2心肌细胞损伤的抗凋亡保护作用并探讨其作用机制.方法 将培养的H9c2心肌细胞随机分为7组,即①正常对照(Con)组;② 缺氧/复氧(H/R)组;③吡那地尔(Pin)组;④美托洛尔(Met)组;⑤谷氨酰胺(Glu)组;⑥胰岛素(Ins)组;⑦ 吡那地尔、美托洛尔、谷氨酰胺和胰岛素4药联用(PMGI)组.细胞经药物处理建立H/R损伤模型,并测定各组H9c2心肌细胞的存活率;收集培养液测定乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性;流式细胞仪检测心肌细胞凋亡百分率;罗丹明123 (Rhodamine123,Rh123)荧光探针标记线粒体,检测荧光强度以反映心肌细胞线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,△Ψm)变化.结果 对于H/R损伤的H9c2心肌细胞,吡那地尔、美托洛尔、谷氨酰胺与胰岛素4药联用组与药物单用组或H/R组相比能明显提高细胞存活率,保护其细胞膜,减少LDH渗漏;减少细胞凋亡率;提高△Ψm.结论 吡那地尔、美托洛尔、谷氨酰胺和胰岛素4药联用后,通过不同途径保护心肌细胞,达到协同抗凋亡作用.
