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神经生长因子对H9 c2心肌细胞缺氧/复氧后凋亡的保护作用及其机制
目的：探讨神经生长因子( NGF)对H9c2心肌细胞缺氧/复氧( H/R)后凋亡的保护作用及其机制。方法将培养的H9 c2心肌细胞随机分为5组：正常对照组( C组)、缺氧/复氧组(H/R组)、NGF组(N组)、NGF+PI3k受体特异性阻断剂LY294002组( N+L组)和LY294002组( L组)。 C组用正常培养液在通有95%空气+5% CO2的37℃培养箱内正常培养8 h；H/R组用预先经95% N2+5% CO2的混合气饱和1 h的模拟缺氧液置换正常培养液后,放入通有95% N2+5% CO2的37℃培养箱缺氧培养4 h,然后将模拟缺氧液换用预先经95%空气+5% CO2饱和的正常培养液,在正常条件下复氧4 h；N组、N+L组和L组先缺氧培养4 h(缺氧条件同H/R组),再分别用预先经95%空气+5% CO2饱和的含NGF、NGF+LY294002和LY294002的正常培养液置换模拟缺氧液,在正常条件下复氧4 h。 NGF和LY294002的终浓度分别为0.05 mg·L-1和3 mg·L-1。 CCK-8比色法测定各组细胞的存活率；应用碘化丙啶( PI)染色流式细胞术检测细胞凋亡率；Western blot法检测胞内Akt磷酸化水平及内质网应激蛋白Caspase-12蛋白的表达。结果 N组与N+L组或H/R组或L组相比能明显提高H9 c2心肌细胞经H/R损伤后的存活率,减少细胞凋亡率,上调Akt磷酸化水平,降低内质网应激蛋白Caspase-12表达；LY294002明显抑制了NGF对Akt磷酸化水平的上调作用。结论 NGF对经H/R损伤的 H9 c2心肌细胞有抗凋亡作用,其机制可能与PI3k-Akt通路有关。
