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皖南尖吻蝮蛇蛇毒中抗肿瘤活性蛋白分离纯化及其活体外性研究
目的:分离纯化皖南尖吻蝮蛇蛇毒(wan-nan Agkistrodon acutus venom)中抗肿瘤活性蛋白并研究其活性.方法:利用DEAE-sepharose Fast Flow和SP-sepharose Fast now阴阳离子交换层析以及Sephadex G-75凝胶过滤层析等分离方法从皖南尖吻蝮蛇蛇毒中分离纯化得一种抗肿瘤活性蛋白,用CCK-8法检测该蛋白对体外培养的白血病K562细胞、结肠癌细胞(SW480)、胃癌细胞(SGC7901)、肝癌细胞(HeptG2)的增殖抑制作用.结果:分离纯化得一相对分子质量约23700的抗肿瘤活性组分(ATF1-c),CCK-8检测对体外培养的K562、SW480、SGC7901、HeptG2细胞的增殖抑制作用,呈剂量-时间依赖关系.结论:ATF1-c对体外培养的人癌细胞有明显的抑制和杀伤作用.
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鹿瓜多肽体外活性测定方法的探讨研究
目的:建立鹿瓜多肽体外活性测定方法.方法:根据鹿瓜多肽药理作用机制,选用敏感骨细胞株作为试验对象,CCK-8比色法探讨鹿瓜多肽对骨细胞株的增殖促进作用.同时对试验条件,包括培养基、细胞接种密度、药物作用时间、胎牛血清(FBS)浓度等进行探讨,建立鹿瓜多肽体外活性测定方法.对该方法线性、重复性进行验证,同时用该方法对2个厂家分别生产的鹿瓜多肽注射液和注射用鹿瓜多肽样品进行活性测定.结果:鹿瓜多肽对大鼠骨肉瘤细胞株(UMR106细胞株)具有增殖促进作用.选用不合谷氨酰胺,含1％ FBS的DMEM培养液进行试验,细胞接种密度为2×104个·mL-1,药物作用细胞72 h,药物质量浓度在0.5～4 mg·mL-1范围内,鹿瓜多肽对UMR106细胞株具有增殖促进作用,刺激指数可达2.97.对该方法进行方法学验证:鹿瓜多肽质量浓度在0.5～4 mg·mL-1范围内,以药物浓度为横坐标,吸收度值为纵坐标进行线性拟合,相关系数(R2)分别为0.971和0.968,均大于0.95,线性良好;对2个厂家生产的鹿瓜多肽注射液和注射用鹿瓜多肽样品重复测定3次,刺激指数平均值分别为2.72和1.86,RSD分别为9.6％和3.9％.结论:该方法可用于鹿瓜多肽体外活性测定.
