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对硝基苯甲酸生长试验鉴别结核与非结核分枝杆菌应用评价
目的 对应用对硝基苯甲酸(PNB)生长试验鉴别结核分枝杆菌复合群(MTC)与非结核分枝杆菌(NTM)进行评价.方法 采用PNB生长试验、PCR-反向核酸探针杂交和PCR-DNA直接测序对52株MTC和264株NTM临床分离株进行鉴定.结果 以PCR-反向核酸探针杂交和PCR-DNA测序结果为鉴定标准,PNB生长试验中52株MTC菌株均为(100%)阴性(-),264株NTM菌株中233株(88%)为阳性(+),31株(12%)为(-).结论 仅应用PNB生长试验鉴别MTC与NTM存在局限性.用PCR-反向核酸探针杂交能将分枝杆菌鉴定至属、将MTC与NTM相鉴别,并能将NTM准确鉴定至种的水平.
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赤道几内亚比奥科岛居民的镰型红细胞病的流行病学调查
目的 了解非洲赤道几内亚比奥科岛(Bioko Island)人群的镰刀形红细胞病(sickle cell disease,SCD)的流行病学特点. 方法 在2013年1月至12月期间,采用红细胞镰变试验对1 036名本岛居民进行筛查.用高分辨熔解曲线(high-resolution melting,HRM)分析和PCR-DNA测序法对筛查阳性的标本进行基因型鉴定. 结果 赤道几内亚比奥科岛居民的SCD发生率为16.99％ (176/1 036).HRM法与PCR-DNA测序法具有较好的一致性(100％). 结论 比奥科岛是SCD高发区,当地政府和卫生部门应采取有效的干预措施来减少这种疾病的危害.HRM法对SCD的鉴定准确性较高.
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云南省西双版纳州傣族G6PD缺陷症发生率及突变谱研究
目的 了解云南省西双版纳州傣族人群的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症的发生率及基因型. 方法 在2012年8月至2013年9月期间,用荧光斑点定性法对812例傣族居民进行G6PD缺乏筛查.用反向斑点杂交芯片和PCR-DNA测序法分析G6PD缺乏症的标本的基因型. 结果 云南西双版纳州傣族人群的G6PD缺乏症总发生率为9.73％ (79/812),其中男性32例(9.07％,32/353),女性47例(10.24％,47/459).79例初筛G6PD缺乏标本65例检测出有突变,共检出8种基因突变类型,含16例1376G＞T(24.24％)、10例1311C＞T (15.15％)、9例1388G＞A(13.63％)、7例392G＞T (10.60％)、6例95A＞G (9.09％)、5例1360C＞ T(7.57％)、2例871 G＞A (3.03％)、1例1024C＞ T(1.52％),和6种复合突变包括2例G871A/C1311T(3.03％)、2例G392T/G1376T(3.03％)、2例G392T/G1388A(3.03％)、1例C1024T/C1311T(1.52％)、1例C1311T/G1376T(1.52％)、1例C1311T/G1388(1.52％).结论 云南西双版纳州傣族G6PD缺乏症检出率高,常见的三种基因型是Gr6PD1376G＞T、1311C＞T和G6PD1388G＞A.在西双版纳地区当地开展G6PD缺乏症的新生儿筛查、产前筛查和遗传咨询是非常有必要的.
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赤道几内亚比奥科岛G6PD缺乏症分子流行病学研究
目的 探讨非州西部赤道几内亚比奥科岛(Bioko Island)人群的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症的发生率及基因型. 方法 在2012年1月至5月期间,用荧光斑点法对2 187名比奥科岛当地居民进行G6PD缺乏症筛查.采用高分辨熔解曲线(High-resolution melting,HRM)分析G6PD缺乏的标本的c.202 G＞A与c.376 A＞G.对HRM筛选不出突变的G6PD酶学缺乏的样本,针对非洲的其他突变类型:c.542 A＞T(rs5030872)、c.680 G＞A(rs137852328)、c.968 T＞C(rs76723693)进行PCR-DNA测序. 结果 赤道几内亚比奥科岛人群的G6PD缺乏症总发生率为8.64％ (189/2 187),其中男性84例(9.04％,84/929),女性105例(8.34％,105/1 258),男女检出率比为1.08:1.在189例G6PD缺乏标本中共检出两种基因类型,其中包括G6PD A变异体(c.376 A＞G/c.202 G＞A)186例(98.41％,186/189G6PD Betica(c.376 A＞G/c.968T＞ C)3例(1.59％3/189). 结论 赤道几内亚比奥科岛是G6PD缺乏症高发区,基因型比较单一.HRM技术可用于非洲地区G6PD缺乏症的临床诊断和流行病学研究.
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云南玉溪葡萄糖-6-磷酸脱氧酶缺乏症基因突变研究
目的:调查云南玉溪G6PD缺乏症的发病率,分析鉴定云南玉溪G6PD缺乏症的基因突变类型及特征,探讨检测G6PD缺乏症基因突变的有效方法.方法:NBT纸片法定性筛查玉溪当地居民450人,NBT定量酶活性,PCR-ARMS法检测中国人中常见的三种突变,作PCR-SSCP分析,后用DNA测序分析和证实.结果:(1)450例当地居民筛查发现G6PD缺乏症患者48例(男31例,女17例).(2)PCR-ARMS发现G1388A 21例(43.75%)、G1376T 4例(8.33%),未见A95G.(3)PCR-SSCP发现27例异常,PCR-DNA测序结果与PCR-ARMS结果吻合.2份未知突变样本测序分析证实为C1311T.(4)测序发现复合型突变:1例G1376T/IVS-11T93C,1例G1376T/C1311T和1例G1388A/IVS-11T93C.结论:(1)云南玉溪G6PD缺乏症发病率为10.67%,男性13.78%,女性7.56%;男、女性别比例1.82.(2)云南玉溪G6PD缺乏症基因突变以Gl388A突变常见,其次是G1376T突变,两种突变共占52.08%,未发现A95G突变.(3)研究云南玉溪G6PD缺乏症基因突变型对指导优生、优育,预防该病的遗传传播,提高我省各地州人口素质具有一定的社会意义.对开展G6PD缺乏症的基因诊断具有一定的应用价值和指导意义.
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汉族和布依族个体preproEGF基因DNA序列中3个新的单核苷酸多态性研究
目的 探测鉴定汉族和布依族个体表皮生长因子前体基因(preproEGF)第20、21外显子及其内含子DNA序列区段中的单核苷酸多态.方法 设计合成11条引物分别以布依族和汉族个体的基因组DNA为模板进行大片段PCR扩增和产物的DNA测序;以GenBank资料库相应的核酸序列为参照分析比较布依族、汉族个体和外国人种的单核苷酸多态分布.结果 布依和汉族个体基因组样本的PCR扩增均得到一条长约4.5 kb的DNA片段,其长度覆盖preproEGF基因的第20、21外显子及其内含子;汉族个体与布依族个体的DNA测序图显示:汉族个体有两个单核苷酸变体存在,一个位于preproEGF基因序列的第86380 bp (C/T),另一个位于第84580 bp(T/-);布依族个体也有一个单核苷酸变体存在,位于preproEGF基因序列的第84329 bp(T/C);与GenBank的DNA序列对比分析发现:汉族个体的(C/T)变体是一个单核苷酸多态位点,迄今虽有报道见于欧洲和非洲撒哈拉民族人种,但在汉民族则未见报道;布依族个体的(T/C)变体也是一个单核苷酸多态位点,该位点的多态虽已有报道见于汉族和其它民族人种,但在布依民族则未见报道.结论 本研究发现了汉族和布依族个体preproEGF基因的第20内含子区段存在3个新的单核苷酸多态,即86380 bp (C/T)、84580 bp(T/-)和84329 bp(T/C),但汉族个体的84580 bp(T/-)单核苷酸多态尚需进一步证实.
关键词： 布依族个体 汉族个体 单核苷酸多态 表皮生长因子前体基因 PCR-DNA测序 -
几个单核苷酸多态在布依族、苗族和汉族个体preproEGF基因中的分布分析
目的 比较分析单核苷酸多态在布依族、苗族和汉族个体preproEGF基因第20、21外显子及其内含子中的分布状况.方法 设计合成11条引物分别以布依族、苗族和汉族各个体的基因组DNA为模板进行大片段PCR扩增;DNA测序各PCR扩增产物; 以GenBank资料库相应的核酸序列为参照分析比较布依族、苗族、汉族个体和外国人种的单核苷酸多态分布.结果 布依、苗和汉族个体基因组样本的PCR扩增均得到一条长约4.5kb的DNA片段,其长度复盖preproEGF基因的第20、2l外显子及第20内含子;与汉族个体相比较,布依族个体DNA测序结果 显示有两个单核苷酸多态位点存在.一个位于preproEGF基因序列的第84329bp(T/C),另一个位于第83634bp(T/-);而苗族个体则仅存在一段长约20bp的套峰区,其中可见两个明确的套峰,分别位于第84583bp(N)和84597bp(N);与GenBank的DNA序列对比分析发现布依族个体的(T/C)多态位点在资料库中虽已报道见于其它民族群体,但在布依民族则未见报道.结论 本研究首次证实了在布依族个体第20内含子区段存在一个单核苷酸多态位点84329bp(T/C);另一个多态位点83634bp(T/-)尚需进一步的研究加以完善证实;苗族个体的20bp套峰区显示其可能存在着杂合等位基因多态.
