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犬尿氨酸/分析文献资料
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Arg188Gln(G/A)突变对犬尿氨酸酶活性的影响
目的:验证犬尿氨酸酶(KYNU)Arg188Gln(G/A)突变能否改变KYNU的活性.方法:抽提人肝脏细胞的总RNA,通过RT-PCR法获得KYNU基因全长cDNA,以KYNU 基因 Arg188Gln 位点附近序列为模板设计定点突变引物,完成Arg188Gln(G/A)的定点突变,将突变型和野生型KYNU基因克隆到pcDNA载体质粒中,获得野生型和突变型pcDNA-KYNU重组表达质粒,经酶切鉴定和测序验证后转染HEK293细胞,蛋白质印迹法检测KYNU在细胞中的表达,用高效液相色谱法检测HEK293细胞的KYNU活性.结果:野生型和突变型pcDNA-KYNU重组质粒在 HEK293细胞中均能表达有活性的 KYNU,KYNU 的米氏常数分别为(9.833 ± 0.513)μmol/L 和(29.900 ± 0.265)μmol/L,大酶促反应速率分别为(0.700 ± 0.096)nmol·mg-1·min-1和(0.084 ± 0.003)nmol·mg-1·min-1,差异均有统计学意义(均P<0.05).结论:Arg188Gln(G/A)突变可以减弱KYNU的活性.
