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干预Hedgehog信号对肾小管上皮细胞增殖细胞核抗原表达的影响
目的：探讨Hedgehog（HH）信号通路的活化和抑制对肾小管上皮细胞中增殖细胞核抗原（PCNA）表达的影响。方法：根据干预措施将体外培养的大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E分为对照组、活化组（10μg/L Shh）和干预组（10μg/L Shh加5μmol/L环杷明）。细胞培养24 h后，细胞免疫荧光染色检测HH信号关键分子Ptch1、Smo和Gli1，以及细胞增殖标志物PCNA的表达，real-time RT-PCR检测Ptch1和Smo mRNA的表达。结果：免疫荧光染色显示，对照组细胞维持一定的增殖状态，HH信号活性较低，PCNA表达水平较低；当外源性重组蛋白Shh活化NRK-52E细胞24 h后，Smo和Gli1 mRNA和蛋白表达显著升高，Ptch1的表达显著下调，这提示Shh可激活HH信号（P＜0.05）。在此过程中，PCNA表达水平显著升高，NRK-52E细胞数量增加，同时伴随细胞形态的改变；在Shh的基础上加入环杷明干预后，HH信号被抑制（P＜0.05），PCNA表达下降，NRK-52E细胞增殖被抑制，出现凋亡或坏死。结论：HH信号与肾小管上皮细胞的增殖密切相关。通过药物调控HH信号的活化，可影响PCNA的表达，进而影响细胞增殖效应。
关键词： Hedgehog信号 环杷明 肾小管上皮细胞 增殖细胞核抗原 -
红花多糖联合环杷明对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响
目的 观察红花多糖联合环杷明对乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响.方法 培养人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测分别加入0.05、0.10、0.20、0.40、0.80 mg/ml红花多糖及2.5、5.0、10.0、20.0、40.0 μmol/L的环杷明培养24、48、72 h的细胞增殖情况,计算半数抑制浓度(IC50);根据IC50选择佳的红花多糖及环杷明作用浓度;将后续实验分为对照组、红花多糖组、环杷明组、红花多糖+环杷明组,CCK-8实验检测4组细胞的增殖水平,流式细胞仪检测4组细胞凋亡水平,Western blot检测4组细胞B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)、Fas、Gli蛋白表达.结果 按照上述浓度处理后,红花多糖作用于细胞24、48、72 h后的IC50分别为(0.89±0.04)、(0.35±0.03)、(0.14 ±0.02) mg/ml,环靶明作用于细胞24、48、72 h后的IC50分别为(56.30±1.23)、(28.85±1.02)、(15.26±0.87) μmol/L,不同浓度及不同作用时间的红花多糖组和环靶明组的细胞存活率均低于对照组.选择0.8 mg/ml红花多糖和20 μmol/L的环杷明进行后续研究;红花多糖组、环杷明组、红花多糖+环杷明组细胞存活率分别为58.76％、56.67％、24.29％,对照组细胞存活率显著高于红花多糖组(P =0.003)、环杷明组(P =0.003)及红花多糖+环靶明组(P=0.000);而红花多糖+环杷明组细胞存活率低于红花多糖组(P =0.005)和环杷明组(P =0.005).红花多糖组、环杷明组、红花多糖+环杷明组细胞凋亡率分别为19.26％、16.24％、26.76％,对照组细胞凋亡率显著低于红花多糖组(P =0.001)、环杷明组(P=0.001)及红花多糖+环靶明组(P =0.000);而红花多糖+环杷明组细胞凋亡率低于红花多糖组(P =0.005)和环杷明组(P =0.004).红花多糖组、环杷明组、红花多糖+环杷明组bcl-2、Glil蛋白表达均显著低于对照组,bax、Fas蛋白表达均显著高于对照组;红花多糖+环杷明组bcl-2、Glil蛋白表达显著低于红花多糖组和环杷明组,而bax、Fas蛋白表达显著高于红花多糖组和环杷明组.结论 红花多糖及Hedgehog信号通路抑制剂环杷明均能抑制人乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖,红花多糖及环杷明联用对细胞增殖、凋亡的作用强于单独用红花多糖和环杷明.
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音猬因子信号通路在小鼠急性胰腺炎中的作用
目的 观察音猬因子(Shh)信号通路在小鼠急性胰腺炎中的作用.方法 雨蛙素腹腔注射诱导急性胰腺炎模型后,引入Hedgehog信号的拮抗剂环杷明(Cyclopamine),用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot方法检测Shh在胰腺组织的表达,同时检测了胰腺髓过氧化物酶(MPO)水平.结果 与对照组比较,雨蛙素注射1h后,Shh表达逐渐升高,在24h到达高.与对照组比较[(231.13 ±10.03) U/mg],MPO活性逐渐升高,6h到达高峰[(1 255.56±126.68) U/mg],24h恢复正常[(230.48±17.69) U/mg].当Cyelopamine抑制Hedgehog信号后,胰腺炎症明显加重.结论 在急性胰腺炎性过程中,Shh起重要的保护作用.
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Shh信号阻断对胰腺癌PANC-1细胞生物学行为的影响
目的 研究胚胎发育相关信号通路Sonic hedgehog(Shh)对人胰腺癌细胞系PANC-1生物学行为的影响.方法 试验组以cyclopamine阻断Shh信号通路,并设立对照,四唑蓝(MTT)比色试验检测Shh信号通路特异性抑制剂cyclopamine对胰腺癌细胞系PANC-1增殖的抑制作用;流式细胞术检测细胞增殖指数(PI)和凋亡指数(AI),Transwell侵袭小室检测两组PANC-1细胞侵袭能力的变化.结果 cyclopamine对PANC-1细胞株增殖的抑制作用呈剂量和时问依赖性.cyclopamine作用后使胰腺癌细胞周期阻滞在G0/G1期,细胞凋亡增加;PANC-1的AI为(15.2±0.54),PI为(38.3±0.23)(P＜0.05).Transwell侵袭小室检测对照组穿透细胞数为(96±4)个,而实验组穿透数为(43±5)个.结论 Shh信号分子对胰腺癌细胞的增殖起维持作用;通过特异性阻断该信号通路,可以抑制胰腺癌细胞增殖,促进细胞凋亡,并抑制癌细胞的侵袭能力.
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Hedgehog 信号通路抑制剂对肝内胆管癌RBE 细胞生物学行为的影响
目的：研究Hedgehog （ Hh）信号通路特异性抑制剂环杷明（ cyclopamine ）对人肝内胆管癌细胞株RBE生物学行为的影响。方法：用台盼蓝染色计数法和MTT比色法检测环杷明对RBE细胞增殖的影响；流式细胞术检测凋亡率，Transwell检测环杷明处理前后RBE细胞侵袭能力的变化，Western blot检测环杷明处理前后RBE细胞中Gli1和MMP-9的蛋白表达变化。结果：环杷明对RBE细胞株增殖的抑制作用呈剂量和时间依赖性。环杷明作用细胞24 h、48 h、72 h后，RBE细胞凋亡率逐渐升高，明显高于对照组的凋亡率。 Transwell检测对照组穿透细胞数为154.52±13.61，而实验组穿透数为62.00±12.17，侵袭能力明显下降（ P＜0.01）。 Gli1和MMP-9蛋白均在RBE细胞中表达，环杷明下调RBE细胞的Gli1和MMP-9表达。结论：阻断Hh信号通路能抑制RBE细胞的增殖，促进其凋亡，并抑制其侵袭能力。
关键词： Hedgehog信号通路 胆内胆管细胞癌 环杷明 -
环杷明对急性脑梗死大鼠血管再生的影响
目的 探索Sonic Hedgehog(Shh)信号通路对脑梗死大鼠血管再生的影响.方法 采用线栓法制作大鼠大脑中动脉脑梗死模型(MCAO)并分组:脑梗死模型组、环杷明处理组(Shh信号通路的特异性抑制剂,造模后立即以0.18 mg/kg的剂量腹腔注射),另设假手术组(只分离血管不插线栓,与环杷明处理组同样的方法注射等量的溶剂乙醇).在大鼠永久性缺血24 h后应用RT-PCR检测脑梗死大鼠缺血半暗带区域Shh信号通路下游因子GLI1 mRNA的表达;免疫组化染色法检测血管内皮生长因子(VEGF)、成纤维细胞生长因子(bFGF)的表达.结果 在缺血半暗带区域的血管内皮细胞及神经细胞中均可检测到有GLI1 mRNA、VEGF和bFGF的表达;模型组与环杷明组GLI1mRNA、VEGF和bFGF的表达均明显高于假手术组(P＜0.05);但环杷明处理组GLI1 mRNA、VEGF和bFGF的表达明显低于模型组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 环杷明可造成急性脑梗死后血管再生相关因子表达下降,可能影响缺血后半暗带区域血管再生,为进一步研究Shh信号通路在急性脑梗死大鼠血管再生中的作用提供了实验基础.
