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姜黄素衍生物L6H4对2型糖尿病大鼠肝组织的保护作用
目的:探讨姜黄素衍生物L6H4对2型糖尿病及高脂大鼠肝组织的保护作用及其机制.方法:40只雄性SD大鼠随机均分为5组:正常对照组、高脂组、高脂治疗组、糖尿病组及糖尿病治疗组.高脂高糖喂养诱导高脂模型,高脂高糖喂养加腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱导2型糖尿病模型.高脂治疗组和糖尿病治疗组用0.2 mg·kg-1·d-1 L6H4灌胃8周.生化法检测大鼠血糖、血脂水平以及血谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、血浆白蛋白(ALB)等肝功能指标;放射免疫法测定血胰岛素(FINs)水平并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);光镜及透射电镜下观察大鼠肝组织形态改变;免疫组织化学法检测大鼠肝脏转化生长因子β1(TGF-β1)、基质金属蛋白酶抑制剂2(TIMP-2)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)的蛋白表达水平.结果:高脂组、糖尿病组血糖,血脂及血清ALT、AST水平显著升高,ALB水平显著下降,经L6H4干预后,高脂治疗组及糖尿病治疗组的血糖,血脂及血清ALT、AST均明显下降,ALB明显增高.高脂组肝细胞脂肪变性,有少量胶原纤维形成;糖尿病组正常肝索结构破坏,肝细胞脂肪变性更为显著,局灶可见坏死,纤维增生明显,纤维间隔增厚,汇管区可见粗大胶原纤维;L6H4治疗后上述形态学改变明显改善.高脂组及糖尿病组肝脏TGF-β1、TIMP-2蛋白表达升高,MMP-2蛋白表达下降,L6H4治疗后,TGF-β1、TIMP-2蛋白表达明显降低,MMP-2蛋白表达明显升高.结论:姜黄素衍生物L6H4可改善2型糖尿病大鼠的糖脂代谢及胰岛素抵抗,对2型糖尿病及高脂大鼠肝组织具有保护作用,抑制肝脏TGF-β1及TIMP-2表达,上调MMP-2表达为其可能机制.
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Drp1和Mfn2在棕榈酸诱导大鼠肝细胞损伤中的作用机制及姜黄素衍生物L6H4的干预作用
目的：研究棕榈酸（PA）诱导肝细胞损伤的体外模拟非酒精性脂肪肝（NAFLD）模型中线粒体发动相关蛋白1（Drp1）和融合蛋白2（Mfn2）的作用机制以及姜黄素衍生物L6H4的保护作用。方法：①分别以不同浓度的PA、油酸（OA）和PA+姜黄素衍生物L6H4的混合培养基培养大鼠BRL-3A正常肝细胞24 h。用MTT法检测细胞活力，以筛选制作体外模拟NAFLD模型的佳PA浓度及姜黄素衍生物L6H4的干预浓度。②将细胞分为4组：对照组（CON组）、油酸组（OA组）、棕榈酸组（PA组）及姜黄素衍生物L6H4干预组（L6H4组），分别给予正常培养基、含有OA的培养基、含有PA的培养基及含有PA和姜黄素衍生物L6H4的混合培养基进行干预，24 h后收获细胞。分别用羟胺法测定总超氧化物歧化酶（T-SOD）含量、硫代巴比妥酸法测定丙二醛（MDA）含量、Real-time PCR及Western Blot法检测肝细胞Drp1、Mfn2、Bcl-2、Bax、Caspase-3、TNF-α mRNA及蛋白的表达。结果：①不同浓度PA对BRL-3A细胞的生长均具有一定的抑制作用，差异具有统计学意义（P＜0.05），并呈明显剂量依赖关系，0.1 mmol/L是分界点，而0.05 mmol/L OA对细胞活力无明显影响。因此选择0.05 mmol/L PA作为佳造模浓度以建立NAFLD体外模型。②当姜黄素衍生物L6H4干预浓度≤10μmol/L 时，细胞活力均高于75%，浓度＞20μmol/L时，细胞活力降至50%以下，差异具有统计学意义（P＜0.05）。10μmol/L时是分界点，因此选择5μmol/L作为后续L6H4干预浓度。③与CON组相比，PA组细胞MDA含量、Drp1、Bax、Caspase-3、TNF-α的mRNA及蛋白的表达均显著增加，差异均具有统计学意义（P＜0.05）；而 T-SOD活力、Mfn2、Bcl-2的mRNA及蛋白表达则显著下降，差异均具有统计学意义（P＜0.05）；与PA组相比， L6H4组的MDA含量、Drp1、Bax、Caspase-3、TNF-α的mRNA及蛋白的表达均显著降低，差异均具有统计学意义（P＜0.05），T-SOD活力、Bcl-2 mRNA及蛋白的表达显著提高，差异均具有统计学意义（P＜0.05），但Mfn2的表达差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：姜黄素衍生物L6H4减轻PA诱导的大鼠BRL-3A正常肝细胞的损伤，其机制可能与其减少肝细胞脂质过氧化反应，抑制线粒体的分裂及其下游线粒体凋亡途径及炎症因子信号传导有关。这可能是姜黄素衍生物L6H4防治NAFLD的机制之一。
关键词： 姜黄素衍生物L6H4 BRL-3A 棕榈酸 线粒体 凋亡
