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人MAGE-3真核表达载体的构建与表达
目的克隆人黑色素瘤特异性抗原MAGE-3基因,构建真核表达载体,建立MAGE-3阳性细胞株,制备肿瘤核酸疫苗.方法用RT-PCR方法扩增MAGE-3 cDNA,以pcDNA3.1+为载体,构建重组表达质粒pcDNA3.1/MAGE-3.重组质粒用脂质体转染鼠B16细胞,经RT-PCR、细胞免疫染色及免疫印迹法鉴定转化细胞中MAGE-3的表达.结果正确构建了pcDNA3.1/MAGE-3重组质粒,并且在转化细胞中检测到了MAGE-3的表达.结论成功构建了pcDNA3.1/MAGE-3真核表达质粒,建立了稳定表达人MAGE-3的鼠B16细胞株.
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恶性黑色素瘤中PTEN蛋白的表达
PTEN (phosphatase and tensin homolog deleted on Chromosome ten)亦称MMA C1(mutated in multiple advanced cancer 1),是新近发现的一种位于10号染色体(10q23) 的抑癌基因[1].在许多肿瘤,如胶质母细胞瘤、前列腺癌、甲状腺癌、乳腺癌、肝细胞癌和恶性黑色素瘤(malignant melanoma, MM)等和肿瘤细胞株中存在该基因的突变 [2～4].本文应用免疫组织化学SP法检测该基因蛋白在MM和皮内痣组织中的表达,旨在探讨PTEN蛋白与MM发生的关系.
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原发性皮肤黑色素瘤的microRNA基因芯片研究
目的 研究原发性皮肤黑色素瘤临床标本中的microRNA基因表达谱,并探讨其与转移的相关性.方法 随机收集16例新鲜原发性皮肤黑色素瘤进行microRNA基因芯片研究,采用主因素分析法聚合分群后再行统计学分析,后选取特殊miRNA行PCR定量分析.结果 在470个miRNA中,有278个miRNA在至少9例标本中没有显示,故剔除,剩下192个miRNA采用主因素分析发现所有标本聚合成两群,Ⅱ群为高转移组,Ⅰ群为低转移组.高转移性皮肤黑色素瘤中低表达2倍以上的miRNA有47个,高表达2倍以上的miRNA有6个,包括let-7b、miR-199a、33、193b、22和miR-222等.对标本定量PCR后发现let-7b、miR.199a和miR-33与临床转移指标(年龄、生存时间、转移和转移性死亡)呈密切正相关.结论 let-7b、miR.199a和miR-33可能在黑色素瘤的转移中发挥了重要功能.
