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稳定表达FLT3-ITD/FIV载体的急性髓细胞白血病细胞株的构建及鉴定
构建稳定表达FLT3-ITD/FIV载体的急性髓细胞白血病细胞(AML)株,为研究FLT3-ITD在急性髓细胞白血病中的作用和以FLIT3为靶点的治疗提供一种新的体外模型.筛选临床上FLT3-ITD突变的AML患者,选取mutant/wt比值高的FLT3-ITD突变作为克隆对象,PCR扩增FLT3基因全长.然后通过同源重组的方法构建FLT3-ITD/FIV慢病毒载体并包病毒,收集病毒液上清液进行K562白血病细胞株感染,通过流式细胞分选术筛选阳性转染细胞.收集阳性转染细胞做Western blot验证阳性质粒的表达情况.207名AML患者中有42例FLT3-ITD突变,成功扩增出了mutant/wt比值高的FLT3-ITD突变患者的FLT3基因全长.双酶切FIV载体和模板DNA,连接以及感受态细胞转化筛选出阳性重组子,双酶切鉴定和测序结果验证.慢病毒成功感染K562白血病细胞株,用流式细胞分选术筛选出了稳定感染的细胞,且该细胞可以传代、扩增.同时,稳定感染细胞的Western blot鉴定也证实了阳性质粒的表达情况.通过筛选FLT3-ITD突变的AML患者,成功构建了稳定表达FLT3-ITD/FIV载体的白血病细胞株,为研究FLT3-ITD在AML发病中的作用以及针对FLT3-ITD为靶点的药物筛选治疗等提供了一个稳定的体外细胞模型.
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治疗FLT3突变的急性髓系白血病的新药米哚妥林
米哚妥林(midostaurin,Rydap?)是瑞士诺华制药公司开发的一种口服多激酶受体抑制药.2017年5月被美国食品药品监督管理局批准上市,主要用于治疗携带FMS 样酪氨酸激酶-3( FMS-like tyrosinekinase 3,FLT3)突变的急性髓系白血病(AML).本文对米哚妥林的药效学、药动学特性、临床研究以及安全性等作一介绍,为其临床应用提供参考.
关键词： 米哚妥林 Fms样酪氨酸激酶-3 急性髓系白血病
