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KCNE1胞外N段功能的研究
目的：研究电压依赖性钾离子通道-IKs通道的调节亚基KCNE1胞外肽段(氨基端肽段，简称N段)的功能，探究胞外N段在KCNE1调控IKs通道中的作用。方法：通过分子生物学技术制备KCNE1的N段缺失突变体；利用Western Blot方法了解突变体的蛋白表达情况；以细胞免疫染色方法观察突变体的亚细胞定位情况；以全细胞膜片钳记录技术检测突变体(与KCNQ1共表达)的通道电流特征。结果：成功构建KCNE1胞外N段缺失的突变体KCNE1-ΔN，突变体体外表达正常；与野生型相比：KCNE1-ΔN在细胞内的分布出现蛋白集聚现象；通道的电流密度减小，激活电压相比较出现了明显的左移，即通道的激活速率变快。结论：KCNE1的N段对其蛋白表达无明显影响，但对蛋白的转运起重要作用；N段参与了KCNE1对通道电流大小的调节，以及对通道激活特征的调控。
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犬心室肌Iks通道的分布及Iso和chromanol 293B对其影响
目的:探讨LQT1发病的分子生物学基础以及 LQT1患者在交感神经兴奋时发生室性心律失常的电生理机制.方法:实验分别采用 western blot方法检测慢激活延迟整流性钾电流 (Iks)通道在犬左心室肌中层和外层的分布情况,以及用玻璃微电极和特制的金属电极,同步记录犬楔形心室肌中层和外层心肌细胞的跨膜动作电位( TAP)和跨壁心电图( TECG),并观察 chromanol 293B( Iks阻断剂)和异丙肾上腺素( Iso)对心室肌细胞动作电位时程( APD90)、跨壁复极离散度( TDR)、QT间期的影响.结果:Iks通道在中层的分布明显少于外层( P< 0.01), chromanol 293B使中层和外层心室肌细胞 APD90均匀延长( P< 0.05), TDR增加不明显( P >0.05), TECG示 QT间期延长( P< 0.05).加入 Iso后,中层心室肌细胞 APD90延长( P< 0.05),并出现早期后除极( EAD),外层心室肌细胞 APD90缩短( P< 0.05), TDR明显增加( P< 0.05), TECG示 QT间期延长( P< 0.05),并能自发产生室性早搏和室性心动过速.结论:Iks通道在心室肌中层和外层分布不均一,而 chromanol 293B和 Iso对中层和外层 Iks通道的影响也不一致,这可能是交感神经兴奋使 LQT1患者发生室性心律失常的机制.
