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磁性壳聚糖纳米介导eNOS基因转染受损平滑肌细胞初探
目的:探讨磁性壳聚糖(后简称磁聚糖)纳米载体对血管平滑肌细胞的毒性及介导内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因对受损血管平滑肌细胞的转染效率、表达及对细胞增生的影响.方法:原位共沉淀法制备磁聚糖并耦合eNOS质粒;MTT法检测磁聚糖对血管平滑肌细胞生长的毒性;分别以重组腺病毒表达载体(AdCMV-eNOS)、磁聚糖-eNOS和磁聚糖空载体在外加磁场下转染受损血管平滑肌细胞,免疫荧光染色及RT-PCR测定eNOS表达,流式细胞术检测转染效率及血管平滑肌细胞周期和凋亡情况.结果:在浓度低于20 mg·ml-1时,磁聚糖对血管平滑肌细胞的生长无明显毒副作用;磁聚糖-eNOS组转染效率[(58-7±3-6)%]较AdCMV-eNOS组[(78-1±2-5)%]低,但两组均检测到eNOS mRNA和蛋白表达,且两组受损血管平滑肌细胞 G0/G1期细胞较磁聚糖空载体组明显增多(P<0-01),S/G2-M期细胞减少(P<0-01),3组的细胞凋亡无显著差异(P>0-05).结论:正常浓度的磁聚糖对血管平滑肌细胞生长无抑制作用,该载体能成功介导eNOS基因的转染,延缓受损后血管平滑肌细胞增生周期.
关键词： 基因载体 磁性壳聚糖 内皮型一氧化氮合酶基因 血管平滑肌细胞 -
磁性壳聚糖纳米微粒合成工艺的优化
目的：优化磁性壳聚糖纳米微粒的制备工艺。方法：用正交设计方法，考察乳液聚合法合成磁性壳聚糖纳米微粒的4个关键因素：壳聚糖与四氧化三铁的重量比、乳化剂用量、交联剂用量和乳液的水油比。用扫描电表征磁性壳聚糖纳米微粒。结果：磁性壳聚糖纳米微粒佳工艺条件为：壳聚糖与四氧化三铁重量比为1∶1，乳化剂用量为0．6mL，交联剂用量为4mL，水相与油相体积比为20∶35。磁性壳聚糖纳米微粒平均直径为50 nm左右。结论：该优级工艺得率高，纳米微粒均匀，已达到相对优条件。
