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肺炎衣原体实时定量PCR检测方法的建立
目的:探讨实时定量PCR检测肺炎衣原体(chlamydia pneumonia,Cpn)的方法.方法:根据GenBank提供的肺炎衣原体基因序列,选取高特异性和保守型的区域进行引物设计,并建立实时定量PCR(real-time PCR,RT-PCR)的检测方法.同时用肺炎支原体、肺炎双球菌、流感病毒、副流感病毒以及腺病毒对Cpn引物的特异性进行分析.对呼吸道感染患者200个咽拭子样本和68个肺泡冲洗液样本进行检测,以荧光抗体检测法作对照,评价实时定量PCR检测Cpn的准确性.结果:Cpn PCR引物对肺炎支原体、肺炎双球菌、流感病毒、副流感病毒以及腺病毒均显示阴性,对Cpn显示为阳性,特异性良好;荧光实时定量PCR技术检测的准确性优于荧光抗体检测法.结论:荧光实时定量PCR技术检测Cpn体灵敏度高、周期短,可作为临床诊断Cpn的手段.
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肾虚质大鼠CD4+CD8+T淋巴细胞亚群表达水平的研究
目的:研究肾虚质大鼠脾脏CD4+、CD8+T淋巴细胞的表达情况.方法:用流式细胞仪直接免疫荧光检测法检测肾虚质大鼠睥脏4+、CD8+T淋巴细胞的百分率.结果:表明CD4+、CD8+T淋巴细胞的百分率明显低于空白对照组(P<0.05).结论:肾虚质大鼠脾细胞悬液中的CD4+、CD8+T淋巴细胞百分率的降低是肾虚质大鼠免疫功能下降的表现,为肾虚体质与免疫力下降之间的相关性提供了理论依据.
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杀菌/通透性增加蛋白的细胞定位
目的确定人体内能产生杀菌/通透性增加蛋白(bactericidal/permeability-increasing protein,BPI)的细胞群体,为研究BPI在细胞内的定位奠定基础. 方法分离人外周血获得嗜中性多形核粒细胞(polymorphonuclear neutrophils,PMN)和单个核细胞,PMN,HL-60及单个核细胞分别进行RNA提取,逆转录PCR反应扩增BPI基因片段和免疫荧光法检测. 结果逆转录PCR在PMN和HL-60细胞中扩增出BPI基因片段,活细胞免疫荧光染色观察到PMN和HL-60能够与抗BPI的单抗所结合而呈阳性. 结论 BPI是中性粒系细胞的特异性产物.
关键词： 杀菌/通透性增加蛋白 逆转录PCR 免疫荧光检测法
