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人Polo样激酶2文献资料
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hPlk2基因真核表达载体的构建及蛋白的表达和定位
目的:构建人Polo样激酶2(hPlk2)真核表达载体并证实该融合蛋白在细胞内的表达及定位.方法:提取工具细胞Hela的mRNA,反转录为cDNA.PCR扩增hPlk2基因cDNA全长,并将其亚克隆至pEGFP-C1表达载体中.然后将构建的重组质粒进行酶切和测序鉴定,并转染到工具细胞COS-7中,提取细胞蛋白进行Western blot检测.后利用激光扫描共聚焦显微镜观察pEGFP-hPlk2在COS-7细胞内的定位.结果:hPlk2基因cDNA全长克隆到了真核表达载体pEGFP-C1中,酶切鉴定片段大小为2058bp,并测序成功.Western blot检测到了pEGFP-hPlk2融合蛋白表达,分子量约为105kDa.pEGFP-hPlk2在COS-7细胞中主要定位于细胞质和核周.结论:成功构建了hPlk2基因cDNA全长的真核表达载体,pEGFP-hPlk2蛋白在COS-7细胞中主要定位于细胞质和核周.
关键词： 人Polo样激酶2 Western blot 绿色荧光蛋白 质粒构建
