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T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3对黑素瘤TRP-2180-188肽疫苗刺激小鼠淋巴细胞的影响
目的 探讨体外T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3(TIM-3)对与小鼠黑素瘤B16F10细胞共培养的酪氨酸相关蛋白-2(TRP-21180-188)抗原肽刺激小鼠淋巴细胞的影响.方法 构建TIM-3重组质粒pFUSE-TIM-3-mIgG2Aae1-Fc2,分别转染重组质粒及空质粒pFUSE-mIgG2Aae 1-Fc2至人上皮293T细胞,继续培养48 h,制备含TIM-3、免疫球蛋白(Ig-tail)的上清液.TRP-2180-188肽疫苗免疫C57BL/6小鼠,分离小鼠脾淋巴细胞,用TRP-2180-188抗原肽和白细胞介素(IL)-2刺激培养5d,以未刺激细胞作为对照组.构建B16F10细胞与上述TRP-2180-188抗原肽刺激淋巴细胞共培养体系,分为空白对照组(加293T细胞培养48 h上清液)、TIM-3组(加含TIM-3上清液)、阴性对照组(加含Ig-tail上清液).CCK-8法检测细胞增殖情况,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测共培养体系中干扰素(IFN)-γ和肿瘤坏死因子(TNF)-α浓度,流式细胞仪检测共培养体系中CD8+T淋巴细胞.结果 酶切和测序鉴定证实目的基因正确插入真核表达载体中,检测到转染重组质粒pFUSE-TIM-3-mIgG2Aae1-Fc2的293T细胞上清液中有TIM-3表达,转染空质粒pFUSE-mIgG2Aae1-Fc2的293T细胞上清液中有Ig-tail的表达.CCK-8法检测显示24 h时空白对照组、阴性对照组、TIM-3组淋巴细胞增殖活力分别为(100.00±10.42)％、(108.70±9.90)％、(78.06±6.37)％,48 h时分别为(100.00±6.24)％、(168.00±2.98)％、(42.93±5.93)％;24 h、48 h时TIM-3组淋巴细胞活力低于空白对照组和阴性对照组(均P＜ 0.05).TIM-3组48 h相比24 h淋巴细胞增殖倍数低于空白对照组和阴性对照组(均P＜0.05).24 h时,空白对照组、阴性对照组、TIM-3组IFN-γ浓度分别为(216.44±7.85)、(223.67±7.79)、(192.96±5.05) ng/L,48 h时分别为(230.06±4.23)、(167.24±3.33)、(54.95±0.57) ng/L.24 h、48 h时,TIM-3组IFN-γ浓度低于空白对照组和阴性对照组(均P＜ 0.05).24 h、48 h时,TIM-3组TNF-α浓度低于空白对照组和阴性对照组(均P＜0.05).24 h时空白对照组、阴性对照组、TIM-3组CD8+T淋巴细胞中位数分别为0.421％、2.22％、3.30％,48 h时分别为0.577％、0.691％、4.06％.24 h、48 h时TIM-3组CD8+T淋巴细胞中位数高于空白对照组和阴性对对照组.结论 TIM-3在体外能够抑制B16F10细胞与TRP-2180-188抗原肽刺激淋巴细胞共培养体系中淋巴细胞增殖和分泌IFN-γ、TNF-α,提高CD8+T淋巴细胞.
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肺炎支原体感染小鼠Th1/Th2平衡状况及Tim-3mRNA的表达
目的 通过检测Tim-3 mRNA的表达水平及IFN-γ、IL-4的含量,初步探讨肺炎支原体感染鼠Th1/Th2细胞的动态变化及Tim-3的免疫调控作用.方法 通过滴鼻感染建立肺炎支原体肺炎小鼠模型,观察小鼠的一般状况,分别于感染后3 d、5 d、7 d、14 d、21 d取材,应用RT-PCR 方法检测肺组织和脾脏Tim-3 mRNA的表达;采用ELISA法检测肺泡灌洗液中细胞因子IFN-γ、IL-4的含量.结果 实验组IFN-γ于3 d出现升高(t=2.309,P<0.05),5 d IFN-γ开始下降,而IL-4于3 d开始升高并一直持续到7 d(t=6.436,P<0.05),之后逐渐恢复正常,肺组织和脾脏Tim-3 mRNA的表达均于5 d达到峰值(t=4.727,P<0.05;t=7.962,P<0.05),且肺组织和脾脏Tim-3 mRNA 表达量与IL-4 呈正相关( r= 0.561,P<0.05;r=0.462,P<0.05),从5 d开始与IFN-γ呈负相关( r= -0.379,P<0.05;r=-0.431,P<0.05).结论 小鼠感染肺炎支原体后Th1/Th2失衡,以Th2介导的免疫反应为主;Tim-3可能参与了感染后对Th1细胞的负调控.
关键词： 肺炎支原体 白细胞介素-4 干扰素-γ T细胞免疫球蛋白粘蛋白-3 细胞因子 -
TIM-3在前列腺癌中的表达及其意义
目的:探讨T细胞免疫球蛋白粘蛋白-3(TIM-3)在男性前列腺癌组织中表达及意义.方法:通过蛋白印迹法(Western blot)和免疫组化法测定TIM-3蛋白在69例前列腺癌标本及邻近良性组织的表达.同时利用四甲基偶氮唑盐法(MTT法)进行细胞增殖试验及细胞侵袭试验.评估TIM-3 siRNA在两种人类前列腺癌细胞株上基因抑制作用.结果:TIM-3在前列腺癌中表达高于良性组织.TIM-3蛋白在两种前列腺癌细胞株上也有表达,TIM-3基因抑制可以阻止前列腺癌细胞株增殖及侵袭能力.结论:TIM-3在前列腺癌增殖、侵袭过程可能起重要作用,可能是前列腺癌患者的不良预后因素之一.
关键词： 前列腺肿瘤 T细胞免疫球蛋白粘蛋白-3 siRNA 细胞增殖 细胞侵袭
