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KSHV ORF73C基因原核表达产物的纯化与免疫原性分析
目的纯化卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)潜伏相关核抗原(LANA)羧基端编码基因ORF73C原核表达蛋白并分析其免疫原性.方法含重组质粒pGEX-6p-1+ORF73C(pORF73C)的宿主菌BL21经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达.用glutathione Sepharose 4B亲和层析柱纯化表达产物后,以重组3C蛋白酶对融合蛋白进行解离,SDS-PAGE对表达及纯化产物进行鉴定.以纯化的ORF73C蛋白免疫小鼠获得抗血清,建立ELISA检测其免疫原性.结果SDS-PAGE显示蛋白条带大小分别为49 000和23 000,与预期的ORF73C融合蛋白及ORF73C蛋白分子量大小一致;ELISA检测显示,抗ORF73C多抗免疫反应性高于未免疫小鼠血清2倍以上.结论成功获得了纯化的ORF73C蛋白,经ELISA显示其有较强免疫原性.
关键词： 卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV) ORF73C 亲和层析 免疫原性 -
卡波济肉瘤相关疱疹病毒潜伏相关核抗原编码基因的克隆及表达
目的:分离卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)潜伏相关核心抗原(LANA)羧基端基因(0RF73C),并在大肠杆菌中克隆和表达.方法:设计一对PCR引物,在引物的5′端分别引入BamH I和EcoR I酶切位点,提取稳定状态的BCBL-1细胞的总DNA作模板,通过PCR扩增KSHV ORF73C,PCR产物经双酶切后按正确的读码框克隆进原核表达质粒pGEX-6p-1中,并转化大肠杆菌感受态细胞BL21,以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白.结果:经核酸序列测定及分析,分离、克隆的ORF73C基因与基因数据库中登记的ORF73基因的羧基端的621bp的序列有99%同源性.经IPTG诱导的重组质粒转化菌体SDS-聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳显示有大小约为46ku的融合蛋白表达.结论:初步表明ORF73C基因在大肠杆菌中获得正确表达.
