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联合诱导法对K562细胞红系分化及其相关基因和膜蛋白表达的影响
目的 优化K562细胞体外红系诱导分化条件,分析红系相关基因和膜蛋白的表达,探讨K562细胞的分化潜能.方法 采用红系诱导联合培养法.优化丁酸钠、促红细胞生成素、氯化高铁血红素、枸橼酸铁等成分组合和剂量组合.鉴定指标选用红系血红素合成酶(eALAs)mRNA和粒系bcr/abl mRNA表达丰度分析、细胞形态学观察、联苯胺染色阳性率计数.红系分化进一步鉴定指标选用Real-time PCR检测10种红系分化相关基因的表达;流式细胞术测定红系细胞膜标志物.结果 K562细胞诱导120 h后,联苯胺染色阳性率达100%;α、β收缩蛋白(spectrin α、β)、带3蛋白(1)antl 3)、eALAS、整合素相关蛋白(CD47)、RhD血型抗原(RhD)、锚蛋白(ankyrin)、红细胞膜带4.2蛋白(EPB 4.2)的mRNA水平为对照组的8.05、14.58、22.87、14.52、26.53、3.48、2.71、1.94倍.而bcr/abl mRNA水平为对照组的39%;红系膜蛋白CD47、bantI 3、RhD水平明显增高(P<0.01),血型糖蛋白A(GPA)无明显差异.结论 优化组合体外红系诱导分化法可使K562细胞稳定向红系分化,并且细胞状态良好,易于进行红系统疾病研究;CD47、band 3、RhD这3种膜蛋白可以作为早期红系分化的敏感指标.
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联合培养法优化K562细胞红系诱导分化及红系相关基因和膜蛋白表达分析
目的 优化K562细胞体外红系诱导分化条件,分析红系相关基因和膜蛋白的表达,探讨K562细胞的分化潜能.方法 采用红系诱导联合培养法,优化诱导试剂丁酸钠、红细胞生成素、氯化高铁血红素等成分组合和剂量组合.诱导效率鉴定指标选用红系ALAS mRNA和粒系bcr/abl mRNA表达丰度分析、细胞形态学观察、联苯胺染色阳性率计数.红系分化进一步鉴定指标选用Realtime-PCR检测10种红系分化相关基因的表达;流式细胞术测定红系细胞膜标志物.结果 优化红系诱导组合联合培养K562细胞120 h后,联苯胺染色计数阳性细胞可达100%.Realtime-PCR检测Spectrina、Spectrinβ、band3、eALAS、CD47、RhD、EPB4.2的mRNA水平分别为对照组的8.05、14.58、22.87、14.52、26.53、3.48、1.94倍,而ber/abl mRNA水平为对照组的0.39倍.流式细胞术测定红系膜蛋白CD47,band3、RhD水平明显增高(P<0.01),GPA无明显差异.结论优化组合体外红系诱导分化法可使K562细胞稳定向红系分化,良好细胞状态利于转外源基因操作,进行红系统疾病研究.RhD比GPA更早在红系细胞表达,可作为早期红系特异标记.
