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miR-224通过调控同源异型盒基因B3表达对大肠癌细胞增殖、凋亡的影响
目的 探讨miR-224通过调控同源异型盒基因B3(HoxB3)表达对大肠癌细胞增殖、凋亡的影响.方法 采用RT-PCR法检测miR-224在大肠癌细胞株及人正常结肠直肠黏膜上皮细胞HIEC中的表达,大肠癌细胞转染miR-224 inhibitor,并通过双荧光素酶实验、Western blot及RT-PCR证实HoxB3是miR-224的靶基因.MTT及AnnexinV-PI法检测miR-224及HoxB3表达量下调后分别对大肠癌细胞活力的影响.流式细胞术检测miR-224 inhibitor对大肠癌细胞周期的影响;Western blot检测miR-224 inhibitor对大肠癌细胞中细胞分裂周期相关蛋白3(CDCA 3)、细胞周期蛋白D1(CyclinD 1)、p21及p27表达的影响.结果 大肠癌细胞中miR-224表达量高于人正常结肠直肠黏膜上皮细胞HIEC,且HCT 116中的表达量高,因此选为后续细胞株.双荧光素酶报告基因证实HoxB3是miR-224下游靶基因,Western blot及RT-PCR结果证实下调miR-244的表达水平后HoxB3蛋白及mRNA表达量均显著下降(P＜0.01).下调miR-224及干扰HoxB3表达都能显著降低HCT116细胞活力(P＜0.01),促进细胞凋亡(P＜0.01).下调miR-224还能使HCT116细胞周期阻滞在G1期,抑制CDCA3及CyclinD1表达(P＜0.01),促进p21及p27表达(P＜0.01).结论 miR-224在大肠癌细胞中高表达,并能通过调控靶基因HoxB3的表达及调节细胞周期相关蛋白的表达而参与大肠癌细胞的增殖与凋亡.
