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大鼠肾小球文献资料
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大鼠肾小球分离和离体培养方法的建立
本文旨在建立大鼠肾小球分离和离体培养的实验方法.应用差异过筛法分离技术分离大鼠肾小球,用Ⅳ型胶原酶消化法去除Bowman囊,用相差显微镜观察肾小球纯度和形态结构,台盼蓝拒染法检测肾小球的活性,双标免疫荧光技术鉴定肾小球固有细胞的标志蛋白nephrin和α-SMA的表达分布,荧光显微镜和酶标仪检测Ang Ⅱ对离体培养肾小球ROS水平的影响,real-time PCR方法观察离体培养的肾小球中TGF-β1 mRNA和collagen Ⅳ mRNA的水平.结果显示,离体培养的肾小球结构完整,无包囊,毛细血管袢结构清晰;离体培养48 h后,肾小球内细胞仍具有活性;激光共聚焦显微镜下可见肾小球内足细胞和间质细胞的标志蛋白nephrin和α-SMA表达清晰;给予离体培养的肾小球Ang Ⅱ刺激后,肾小球ROS的产生明显增加,TGF-β1和collagen Ⅳ mRNA水平升高.以上结果提示,大鼠肾小球的分离及离体培养技术建立成功,该分离方法获得的肾小球可以进行离体培养及药物作用观察,为基础和临床研究提供实验技术和研究手段.
