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MEN1胰岛瘤中细胞周期蛋白cyclin B2高表达的作用和机制
多发性内分泌肿瘤1-(multiple endocrine neoplasia type 1,MEN1)是一种常染色体显性遗传的肿瘤综合征,患者常表现出多发性的内分泌器官肿瘤,包括垂体瘤、甲状旁腺瘤和胰岛瘤.抑癌基因Men1的突变导致MENl的发生,其编码的蛋白为核蛋白menin.Menin可以抑制包括胰岛β细胞在内的内分泌细胞增殖.本文探讨menin通过抑制细胞增殖来抑制MEN1胰岛瘤的可能机制.在基因芯片的分析中,喂养它莫西酚(tamoxifen)14 d后诱导条件敲除Men1的小鼠胰岛中cyclin B2表达上升.免疫荧光的实验显示在小鼠MEN1胰岛瘤的组织切片中,cyclin B2表达量显著增加.细胞水平的研究显示,在Menl敲除的细胞中,cyclin B2表达量上升.以第10位丝氨酸磷酸化的组蛋白H3 (phospho-H3S10)抗体对细胞进行免疫荧光实验,显示Men1敲除的细胞中处于有丝分裂的细胞数增加.以5×104的密度接种细胞,在第2天、第4天和第6大的时候分别对细胞计数,显示Men1敲除的细胞增殖加快.相反地,用shRNA敲低细胞中的cyclin B2,则细胞中处于有丝分裂的细胞数减少,细胞增长减慢.染色质免疫沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP)分析显示,menin影响了cyclin B2启动子区组蛋白H3第4位赖氨酸的三甲基化水平及组蛋白H3的乙酰化水平,但不影响组蛋白H3第9位赖氨酸和第27位赖氨酸的三甲基化水平.上述结果提示menin可能通过组蛋白修饰而抑制cyclinB2的表达从而抑制了MEN1胰岛瘤的生长.
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紫杉醇放射增敏作用的分子机制
背景与目的:紫杉醇作为一种放射增敏剂,能稳定微管系统,把细胞阻断在G2/M期从而改变肿瘤细胞的放射反应性.但其分子机制目前还未完全阐明,本文旨在研究紫杉醇的放射增敏作用及其分子机制.方法:克隆形成实验分析不同浓度紫杉醇联合不同剂量照射对KB细胞增殖抑制率的影响,多靶单击拟合模型方程测定各组细胞放射增敏比并评价增敏效果:流式细胞仪检测KB细胞经紫杉醇及射线共同作用后细胞周期分布变化;采用基因芯片技术筛选与紫杉醇放射增敏作用相关的差异表达基因;荧光定量PCR验证芯片提示细胞分裂相关基因PRC 1、cyelin B2的变化.结果:紫杉醇与射线协同作用能明显抑制KB细胞增殖,20 nmoVL药物协同射线作用时SERDo及SERDq分别为2.40±1.87、12.23±2.81.药物加照射处理后G1期细胞由48.32~2±40％下降为15.73±7.00％(P<0.01),G2/M期细胞由13.66±2.16％上升到52.5l±5.02％(P<0.01).基因芯片结果显示的差异变化基因中共有176条与紫杉醇放射增敏作用相关,10条在调控细胞分裂过程中起作用.其中上调表达2条,下调表达8条.荧光定量PCR证实与细胞分裂相关的PRC1和Cyclin B2均下调表达,与芯片结果一致.结论：紫杉醇对KB细胞有明显的放射增敏作用.其机制可能是使细胞有丝分裂相关基因PRCl和Cyclin B2表达特异性下调,导致双极纺锤体形成受阻,细胞无法完成正常的分裂,从而使细胞增殖受到抑制并终死亡.
