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小鼠体细胞核移植重构胚中γ-微管蛋白的动态变化
本文旨在研究小鼠体细胞核移植(somatic cell nuclear transfer,SCNT)重构胚中γ-微管蛋白的动态变化.采用免疫荧光化学染色与激光共聚焦显微镜观察的方法,对去核前后第二次减数分裂中期(metaphase Ⅱ of meiosis,MⅡ)的卵母细胞和核移植后的重构胚进行γ-微管蛋白的定位观察,分析γ-微管蛋白的作用.结果显示,MⅡ期卵母细胞去核后,γ-微管蛋白主要分布于皮层；卵母细胞激活后随着胞质星体的逐渐增多,皮层γ-微管蛋白明显减少,但没有新的纺锤体形成.卵丘细胞注入去核MⅡ期卵母细胞后,经SrCl2激活能形成一个纺锤体,在分裂前期,斑点状的γ-微管蛋白散布在染色体之间；在分裂中期,γ-微管蛋白沿着纺锤体分布或聚集于纺锤体两极；在分裂后期或末期,γ-微管蛋白迁移到分开的染色单体之间.部分重构胚发生提前激活,形成异常纺锤体,主要表现在γ-微管蛋白和染色体分布异常.卵丘细胞注入未去核的MⅡ期卵母细胞后,经SrCl2激活后能形成两个纺锤体,γ-微管蛋白的分布与正常核移植相类似.同样,部分卵母细胞发生提前激活,形成两个小梭形纺锤体或一个宽而大的桶状纺锤体.以上结果提示,供体细胞核内的γ-微管蛋白在SCNT重构胚纺锤体组装过程中发挥着关键作用；SCNT重构胚易被提前激活形成异常纺锤体,γ-微管蛋白的异常与染色体分布失常和纺锤体结构异常密切相关.
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小鼠孤雌胚早期发育过程中γ-微管蛋白的动态变化
微管蛋白是构成微管的主要蛋白,其中a、β亚单位形成异二聚体,而γ-微管蛋白在微管组装中起作用.为了研究小鼠早期孤雌胚中γ-微管蛋门的动态变化,本实验采用了免疫荧光化学染色与激光共聚焦显微镜观察相结合的方法,在SrCl2激活的卵母细胞减数分裂以及早期孤雌胚有丝分裂过程中对γ-微管蛋白进行了定位观察.结果显示,SrCl2和细胞松弛素B(cytochalasin B,CB)诱导的第二次减数分裂中期(metaphase Ⅱ of meiosis,MII)小鼠卵母细胞恢复减数分裂,并且纺锤体始终与质膜平行,表明纺锤体旋转被抑制,但核分裂不受影响.减数分裂过程中γ-微管蛋F1主要定位于中期纺锤体两极和后期分开的染色单体之间:孤雌活化两雌原核形成以后,γ-微管蛋白聚集在两雌原核周围.在早期孤雌胚有丝分裂间期无定形的γ-微管蛋白均匀分布于核;前中期γ-微管蛋白向两极移动,遍布于整个纺锤体区.有丝分裂中期、后期和末期γ-微管蛋白的分布变化与减数分裂相似.结粜表明,SrCl2和CB激活的MII卵母细胞产牛杂合二倍体;γ-微管蛋白具有促微管负极帽形成和稳定微管的功能,从而促进纺锤体的形成;分裂后期和木期γ-微管蛋白的重新分布可能足由纺锤体牵引同源染色体分离所诱导的;γ-微管蛋白负责两雌原核的迁移靠近.
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长春新碱对K562细胞plk1和γ-微管蛋白表达影响的研究
目的研究长春新碱对K562细胞周期及plk1和γ-微管蛋白影响.方法分析长春新碱处理后K562细胞周期变化,检测长春新碱及plk1反义寡核苷酸处理后plk1 and γ-微管蛋白表达.结果长春新碱诱导K562细胞G2/M期阻滞.长春新碱影响plk1的聚集和γ-微管蛋白形成中心体,plk1反义寡核苷酸同样可影响γ-微管蛋白形成中心体.结论长春新碱诱导K562细胞G2/M期阻滞的机制可能是通过抑制plk1的聚集和γ-微管蛋白形成中心体来实现的.
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口腔鳞状细胞癌中PLK1蛋白表达与中心体扩增
目的:探讨口腔鳞状细胞癌(Oral Squamous Cell Carcinoma,OSCC)中保罗样激酶-1(Polo-Like Kinase1,PLK1)蛋白表达与中心体扩增之间的相关性.方法:采用免疫组化SABC法检测10例正常口腔黏膜和47例OSCC中PLK1蛋白和γ-微管蛋白的表达情况,并分析两者之间的相关性.结果:PLK1蛋白和γ-微管蛋白在正常口腔黏膜组和OSCC组中的阳性表达率分别为0.0％(0/10)、70.2％ (33/47)和0.0％(0/10)、76.6％(36/47),PLK1蛋白和γ-微管蛋白表达在正常口腔黏膜组和OSCC组之间的差异均具有统计学意义,P＜ 0.05;Spearman相关分析显示,OSCC组织中PLK1蛋白与γ-微管蛋白表达之间正相关,r=0.305,P＜0.05.结论:PLK1蛋白过表达可能是中心体扩增的潜在机制之一,PLK1蛋白过表达导致中心体扩增及细胞恶性增殖在OSCC发生中可能起一定的作用.
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中心体α-微管蛋白、γ-微管蛋白在脑胶质瘤中的表达及其与Survivin表达的相关性研究
目的 探讨中心体α-微管蛋白和γ-微管蛋白在脑胶质瘤中的表达,及其与凋亡抑制基因Survivin表达的相关性.方法 应用免疫组织化学方法检测51例脑胶质瘤组织中α-微管蛋白、Survivin蛋白的表达,免疫荧光染色方法检测γ-微管蛋白的表达,并分析其之间的相关性.结果 脑胶质瘤高级别纽(Ⅲ～Ⅳ级)α-微管蛋白、γ-微管蛋白及Survivin蛋白表达阳性率(88.0%、80.0%、92.0%)明显高于低级别组(Ⅰ、Ⅱ级)(22.2%、47.1%;11.1%、35.3%;33.3%、52.9%),且差异具有统计学意义(P均<0.0125).α-微管蛋白、γ-微管蛋白与Survivin表达之间均呈正相关(r分别为0.4404、0.547 8,P<0.05).结论 α-微管蛋白、γ-微管蛋白和Survivin在胶质瘤中的表达随恶性程度升高而增加,且相互之间均呈正相关.微管蛋白与Survivin的相互作用可能是胶质瘤发生发展过程中的重要事件.
关键词： 脑胶质瘤 α-微管蛋白 γ-微管蛋白 Survivin蛋白 中心体
