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促红细胞生成素(EPO)对叶酸在Caco-2细胞中跨膜转运的影响
目的 采用人结肠腺癌细胞系(human colon adenocarcinoma cell line) Caco-2单细胞层模型观察促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)对叶酸跨膜转运的影响.方法采用Caco-2单层细胞模型,观察不同剂量EPO (0.3、1、3 U/mL)处理对叶酸在摄取与外排双向转运方面的影响.通过real time-PCR与Western blot观察EPO处理对质子偶联的叶酸转运体(proton coupled folate transporter,PCFT)、还原叶酸载体(reduced folate carrier,RFC)以及多药耐药相关蛋白2 (multidrug resistance-associated protein 2,MRP2)表达的影响.结果EPO在剂量0.3~3 U/mL范围内可剂量依赖地增加叶酸在摄取方向的转运,增幅分别为31.6%、61.5%和120.5%.高剂量EPO(3 U/mL)对叶酸在外排方向的转运也具有促进作用,增幅为56.9%,而中低剂量EPO (1、0.3 U/mL)对叶酸外排无明显作用.叶酸转运体PCFT、RFC及MRP2均受EPO影响而表达上调,并呈剂量依赖和时间依赖关系.结论 EPO可上调叶酸的摄取并呈剂量依赖关系,高剂量EPO对叶酸的摄取与外排具有双向促进作用.
关键词： 叶酸 促红细胞生成素(EPO) Caco-2细胞 叶酸转运体 -
甲氨蝶呤耐受型骨肉瘤细胞中给药剂量与叶酸转运基因表达的相关性研究
目的 探讨分析甲氨蝶呤(MTX)药物浓度与叶酸转运基因(FOLT)表达的相关性.方法 利用噻唑蓝(MTT)实验,检测MTX耐受的Saos-2/MTX2.2、Saos-2/MTX4.4对比野生型Saos-2细胞对化疗药物顺铂(DDP)、MTX、表阿霉素(EPI)、异环磷酰胺(IFO)、吡喃阿霉素(THP)、四氢和紫杉酚(PTX)和阿霉素(ADM)的敏感性,测得各自的半数抑制浓度(IC50).应用半定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)实验,分析FOLT基因的表达水平.结果 Saos-2/MTX2.2细胞对MTX[细胞的抵抗度(RI)=6.51]、IFO(RI=4.54)、THP(RI =3.13)和ADM(RI=4.40)药物的IC50值显著升高;而Saos-2/MTX4.4细胞对MTX(RI=17.72)、EPI(RI =3.13)、IFO(RI =5.11)、THP(RI=4.43)和ADM(RI=4.40)药物的IC50值显著升高.该两株细胞对抗肿瘤药物IFO、ADM、EPI、THP和PTX均有耐受性,FOLT基因在野生型Saos-2细胞中表达更高,在MTX耐受型Saos-2/MTX2.2、Saos-2/MTX4.4中表达显著下降.结论 在骨肉瘤中FOLT基因表达与MTX耐受显著相关,骨肉瘤MTX化疗中,FOLT低表达或功能失调是导致原发性药物抵抗的主要机制之一.
