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流式细胞术检测细胞内活性氧的方法
目的流式细胞术检测NB4和U937细胞内活性氧(reactive oxygen species，ROS)的水平。方法双氢罗丹明123(DHR)以不同的时间孵育细胞(1、6、24h)，DHR可被细胞内ROS氧化为罗丹明123，通过流式细胞仪来检测细胞内罗丹明123的荧光，同时设立阴性及阳性对照。结果 1μmol/L DHR孵育细胞，1～24h NB4和U937细胞内的平均荧光强度分别从19.20增加到384.38和12.31增加到97.15。结论适当延长DHR孵育时间可检测不同细胞系ROS基准水平的差异。
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流式细胞术检测中性粒细胞产生活性氧方法学探讨
目的:建立用流式细胞术检测人外周血中性粒细胞(polymorphonuclear cells,PMN)产生活性氧(reactive oxygen species,ROS)的方法.方法:健康人外周全血或用Percoll分离的PMN,加探荧光针双氢罗丹明123(DHR123)或2',7'-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)作用15 min,再加佛波醇酯(phorbo 12-myristate 13-acetate,PMA)于37 ℃作用5～90 min后,用流式细胞仪检测PMN内的罗丹明123(rhodamine 123,RHO)或氧化型二氯荧光素(dichlorofluorecin,DCF)的荧光强度,以反映PMN内ROS产生的水平.结果:以DHR123为荧光探针时,PMA刺激全血或分离PMN产生ROS的时间动力学相似,在37 ℃作用5～60 min ROS量呈递增趋势,且在60 min左右达到峰值,60～90 min时渐下降.以DCFH-DA为荧光探针时,PMA刺激全血PMN产生ROS,在37 ℃作用5 min时反应生成ROS量达到峰值,随后出现明显递减趋势,而PMA刺激分离PMN产生ROS在5～30 min逐渐增高并在60～90 min达平台期.实验中还发现甲醛试剂可以降低RHO的荧光强度.结论:采用流式细胞术检测PMN产生ROS是一种简便、可靠、稳定的方法.
