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在结肠癌细胞内高效表达内皮抑素的增殖型腺病毒载体的构建与鉴定
目的:构建携带内皮抑素基因的增殖型腺病毒载体,寻找结肠癌的有效治疗方法.方法:通过RT-PCR克隆内皮抑素基因,293细胞内分别重组携带内皮抑素基因的增殖型(CNHK200-hE)和增殖缺陷型(Ad-hE)腺病毒,分别体外感染结肠癌细胞HT-29后比较两者在细胞病理效应、病毒增殖和内皮抑素表达量方面的差异.结果:CNHK200-hE感染结肠癌细胞96 h后可增殖2 000多倍;感染后7 d肿瘤细胞死亡率达96.2%,而对正常肝细胞基本无杀伤作用;随着感染时间的延长,肿瘤细胞培养上清液中内皮抑素表达量不断增加,第5天达1 090 ng/ml,显著高于Ad-hE感染组(P<0.01).结论:携带内皮抑素基因的增殖型腺病毒CNHK200-hE具有高效表达内皮抑素和在结肠癌细胞内增殖并杀灭肿瘤细胞的作用.
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非增殖型和靶向增殖型腺病毒携带TRAIL基因治疗肝癌的实验研究
目的 比较携带人TRAIL基因的增殖型腺病毒(CNHK500-hTRAIL)和非增殖型腺病毒(Ad-hTRAIL)对TRAIL基因的表达以及对SMMC-7721肝癌细胞的杀伤能力.方法 通过病毒增殖实验评估增殖型腺病毒CNHK500-hTRAIL的选择性增殖能力.通过MIT实验,评估增殖型腺病毒CNHK500-hTRAIL以及非增殖型腺病毒Ad-hTRAIL对人正常肝细胞株L02、人肝癌细胞株SMMC-7721的杀伤能力.采用ELISA法检测CNHK500-hTRAIL和Ad-hTRAIL感染SMMC-7721肝癌细胞后TRAIL基因的表达情况.以及通过流式细胞术(FCM)检测其对细胞早期凋亡的影响.结果 CNHK500-hTRAIL能选择性地在SMMC-7721细胞内大量增殖,感染96 h后增殖达225137倍,在极低的MOI值(MOI=0.1)即可大量杀伤SMMC-7721细胞,明显强于Ad-hTRAIL,而对L02细胞无明显杀伤.CNHK500-hTRAIL和Ad-hTRAIL感染SMMC-7721细胞后,其TRAIL基因表达量,前者是后者的近10倍;CNHK500-hTRAIL可选择性地诱导SMMC-7721细胞早期凋亡,其能力显著高于Ad-hTRAIL.结论 靶向增殖型腺病毒载体携带TRAIL基因对肿瘤细胞的杀伤能力和目的基因的表达,明显优于传统的非增殖型腺病毒载体,应用前景广阔.
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携带白细胞介素-24的增殖型腺病毒联合放疗诱导黑素瘤细胞凋亡的研究
恶性黑素瘤的预后不良性除其较高的远处转移率及侵袭能力较强外,主要因其对常规治疗手段如放化疗等敏感性较低所致[1].白细胞介素-24(IL-24)是新发现的肿瘤抑制基因,能选择性抑制黑素瘤等多种肿瘤的生长并诱导其凋亡,还可以抑制肿瘤血管形成,增强肿瘤细胞对放化疗的敏感性[2].近年来,用增殖型腺病毒为载体携带基因治疗肿瘤成了科学研究的热点[3].本研究旨在观察携带IL-24基因的增殖型腺病毒ZD55-IL-24在黑素瘤细胞中的表达及联合低剂量放疗后的变化,探讨ZD55-IL-24联合放疗增强诱导黑素瘤细胞凋亡的作用.
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携带小鼠白介素12基因的增殖型腺病毒对胃癌细胞株化疗敏感性影响的研究
目的研究携带白介素12(mIL-12)基因的增殖型腺病毒 CNHK200-mIL-12对胃癌细胞株化疗敏感性的影响.方法 扩增增殖型腺病毒 Onyx-015及携带小鼠mIL-12基因的增殖型腺病毒CNHK200-mIL-12,利用 MTT法测定同一病毒滴度下联合应用不同浓度化疗药物及同一化疗药物浓度下联合应用不同滴度病毒对胃癌细胞株杀伤作用,并观察增殖型腺病毒联合化疗药物对裸鼠腹腔种植瘤的抑制作用.结果 当不同感染复数(MOI)=0.5时,增殖型病毒 Onyx-015、CNHK200-mIL-12对胃癌细胞 SGC-7901无明显的杀伤作用.加入化疗药物阿霉素(ADM)、氟尿嘧啶(5-Fu)和卡铂(CAP)后,两者对SGC-7901的杀伤率随着药物浓度增加都有不同程度的升高,与单纯使用化疗药物组比较,差异有统计学意义(P<0.05).浓度为10μg/ml的 5-Fu对 SGC-7901的杀伤作用不明显,单用增殖型腺病毒对 SGC-7901的杀伤作用也较弱,两者联合应用杀伤活性明显提高,与未加 5-Fu组比较,差异有统计学意义(P<0.05).动物试验证明:经 Onyx-015联合 5-Fu治疗后,裸鼠腹腔内肿瘤形成率为 1/6,而 CNHK200-mIL-12联合 5-Fu组未见腹腔内肿瘤生长,与单用增殖型腺病毒或单用化疗者比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论携带 mIL-12基因的增殖型腺病毒能够提高胃癌细胞株对化疗药物的敏感性,在杀伤胃癌细胞株的作用中具有协同性.
