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碱性成纤维细胞生长因子对国产多孔钽-软骨细胞复合物软骨细胞表型维持及去分化的影响
目的 对比不同浓度碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对国产多孔钽-软骨细胞复合物维持软骨细胞表型和去分化作用的影响.方法 分离培养3周龄新西兰幼兔膝关节软骨细胞,Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色、番红O (Safranin O)染色鉴定软骨细胞;取第3代软骨细胞分为5组:A组(1 ng/mL bFGF-多孔钽-软骨细胞),B组(10 ng/mL bFGF-多孔钽-软骨细胞),C组(50 ng/mL bFGF-多孔钽软骨细胞),D组(多孔钽-软骨细胞)及E组(软骨细胞);MTT法检测不同浓度bFGF对多孔钽-软骨细胞生长及增殖状态的影响;扫描电镜观察bFGF-多孔钽-软骨细胞复合物细胞形态及生长;Ⅰ、Ⅱ、Ⅸ、Ⅹ型胶原免疫细胞化学染色检测软骨细胞表型变化及去分化状态;real time-PCR检测软骨细胞Ⅱ、Ⅹ型胶原mRNA表达.结果 Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色及Safranin O染色均呈阳性反应,证实所分离培养的细胞为软骨细胞;1、10、50 ng/mL bFGF均可促进软骨细胞增殖,各实验组(A～D组)软骨细胞增殖与对照组(E组)相比,差异有统计学意义,其中10 ng/mL bFGF-多孔钽-软骨细胞增殖为明显(P＜0.05);组间比较差异有统计学意义(P＜0.05);扫描电镜观察:各组软骨细胞在多孔钽表面及孔隙内生长、黏附,早期呈不等的球形,24 h后胞质延展并向周围伸出多条突起,相互连接、延展向孔隙内部生长,细胞间相互融合并覆盖支架材料;Ⅰ、Ⅱ、Ⅸ和Ⅹ型胶原免疫细胞化学染色显示10 ng/mL bFGF-多孔钽-软骨细胞组(B组)Ⅱ和Ⅸ型胶原表达高于对照组(E组,P＜0.05),组间差异也有统计学意义(P＜0.05);而Ⅰ和Ⅹ型胶原表达则低于对照组(E组,P＜0.05);real time-PCR检测软骨细胞Ⅱ、Ⅹ型胶原mRNA表达显示:各实验组(A～D组)Ⅱ型胶原mRNA的表达高于对照组(E组,P＜0.05),而Ⅹ型胶原mRNA表达量则低于对照组(E组,P＜0.05).结论 bFGF能维持多孔钽-软骨细胞复合物软骨细胞表型,抑制去分化,加强软骨细胞分泌功能.
关键词： 碱性成纤维细胞生长因子 国产多孔钽 表型 细胞去分化 软骨细胞 -
MG63细胞与国产多孔钽材料共培养后成骨相关因子的表达研究
目的 观察MG63细胞与国产多孔钽材料共培养后成骨相关因子的表达,探讨该材料作为骨组织工程支架的可行性.方法 实验分为3组,A组为多孔钽材料与MG63细胞共培养组,B组为多孔钽浸提液与MG63细胞共培养组,C组为单纯MG63细胞培养组.A组于培养后3、5、7d行扫描电镜观察细胞在材料上的黏附情况;培养5d分别采用免疫组织化学染色和Western blot检测各组成骨相关因子Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,Runx-2)、骨钙素(osteocalcin,OC)和纤维连接蛋白(fibronectin,FN)的表达.结果 培养3d,A组细胞在材料表面及孔隙内黏附生长,细胞排列较稀疏,突起少;5d,相邻细胞互相连接成片状,覆盖材料表面及孔隙内壁;7d,细胞分泌大量细胞外基质,覆盖大部分材料表面.各组细胞均有不同程度Runx-2、OC和FN表达,其中A组细胞质深染,表达较其余2组明显.免疫组织化学染色和Western blot定量分析示,A组Runx-2、OC表达量显著高于B、C组(P＜0.05);B、C组间差异无统计学意义(P＞0.05).3组间FN表达量比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 国产多孔钽材料有利于MG63细胞的早期黏附、生长,并可能影响Runx-2、OC的表达,可用作骨组织工程支架材料.
