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DC-CIK对急性髓细胞白血病干细胞的杀伤作用
目的:研究树突状细胞( dendritic cell,DC)联合同源细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cell,CIK)对急性髓细胞白血病细胞株KG-1a中白血病干细胞(leukemic stem cell,LSC)的体外杀伤和诱导凋亡作用.方法:分离健康人外周血单个核细胞,贴壁细胞用GM-CSF和IL-4诱导培养DC,悬浮细胞用IL-2、IL-1、IFN-γ和CD3 mAb诱导培养CIK.将KG-1a细胞冻融物作为抗原负载DC(即Ag-DC),与CIK共培养作为实验组(Ag-DC-CIK),无抗原负载的DC与CIK共培养作为对照组(DC-CIK),单独CIK作为空白对照组,与KG-1a共育后流式细胞术检测各组细胞中CD34+ CD38 - CD123+白血病干细胞的比例.DC-CIK与KG-1a细胞共培养,流式细胞术检测各组细胞中KG-1a细胞与CD34+ CD38 - CD123+细胞的凋亡率.结果:外周血单个核细胞成功诱导DC.CIK组、DC-CIK组及Ag-DC-CIK组中CD3+ CD56+细胞比例为(17.36 ±4.44)％、(28.22±3.66)％和(36.16±5.88)％,依次升高(P＜0.05).与对照组相比,Ag-DC-CIK组与DC-CIK组细胞中CD34+ CD38 -CD123+细胞比例显著降低[(8.78±0.62)％ vs (3.95±0.53)％、(3.03±0.62)％,P＜0.01|.DC-CIK可诱导KG-1a细胞凋亡,凋亡率由(2.34±0.74)％上升至(12.27±1.01)％,但对其中CD34+ CD38 - CD123+细胞无明显的诱导凋亡作用.结论:DC联合CIK能杀伤急性髓细胞白血病干细胞,但无明显的诱导凋亡作用.
关键词： 树突状细胞 细胞因子诱导的杀伤细胞 急性髓细胞白血病干细胞 -
低浓度雷公藤甲素增强去甲氧柔红霉素杀伤急性髓细胞白血病干细胞的能力
目的 探讨低浓度雷公藤甲素(triptolide,TPL)能否增强去甲氧柔红霉素(idarubicin,IDA)杀伤急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)干细胞的能力及与Nrf2通路的关系.方法 流式细胞仪从KGla细胞株中分选CD34+ CD38-亚群,将其作为AML干细胞模型;MTT检测TPL单药组、IDA单药组、TPL+ IDA组处理AML干细胞72 h后细胞抑制率和CI指数;Western blot检测IC20浓度的TPL(5 nmol/L)、IC50浓度的IDA (27 nmol/L)单药及上述浓度的TPL联合IDA作用AML干细胞后Nrf2蛋白表达水平的变化;实时荧光定量PCR检测各组处理后Nrf2及其下游基因NQO1、GSR、HO-1的mRNA表达水平的变化.结果 MTT结果显示TPL和IDA单药对AML干细胞具有一定的增殖抑制作用,72 h的IC50值分别为(20.48±1.60) nmol/L和(285.20±13.74)nmol/L;而小剂量TPL(IC20值,5 nmol/L)与不同浓度IDA联合作用于AML干细胞后的增殖抑制作用显著高于IDA单药,IC50值也从IDA单药的(285.20±13.74) nmol/L下降到双药联合(27.01±0.73)nmol/L,差异有统计学意义(P＜0.01).联合作用指数CI值提示两药合用具有强协同作用.West-ern blot检测结果显示TPL联合IDA处理AML干细胞后Nrt2蛋白表达水平降低.定量PCR检测结果显示,TPL联合IDA处理AML干细胞后Nrf2及其下游基因NQO1、GSR及HO-1的mRNA表达水平均显著下降(P＜0.01).结论 低浓度TPL能显著增强IDA对AML干细胞的杀伤作用,其机制可能与下调Nrf2通路相关.
关键词： 急性髓细胞白血病干细胞 雷公藤甲素 IDA
