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细胞间直接接触文献资料
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细胞间直接接触诱导BMSC软骨分化的初步研究
目的 探讨细胞间直接接触是否能够单独诱导骨髓基质干细胞(Bone Marrow Stromal Cells,BMSC)软骨分化.方法 体外培养扩增猪BMSC与关节软骨细胞,将1.0×106的细胞总量以2 000 r/min离心8 min,制成细胞团块,即Pellet培养.实验分为5组,实验组:经0.5%多聚甲醛固定的软骨细胞与BMSC以1∶1混合;对照组1:同等数量的未经多聚甲醛固定的软骨细胞与BMSC 1∶1共培养制成Pellet;对照组2:同等数量的单纯软骨细胞制成Pellet;对照组3:同等数量的单纯BMSC制成Pellet;对照组4:同等数量的单纯经多聚甲醛固定的软骨细胞制成Pellet.每3天换液一次,每组3例.培养4周后,以大体观察、组织学、免疫组织化学、RT-PCR等方法对Pellet进行全面评价.结果 培养4周后,实验组形成的Pellet,明显缩小,形状略不规则,颜色灰暗,柔软且没有弹性,组织学检测提示主要为纤维性成分及死细胞样结构,Safranin O染色及Ⅱ型胶原免疫组化均为阴性,RT-PCR检测未表达Ⅱ型胶原.对照组1和对照组2均形成圆盘状组织块,表面光滑,触之有一定弹性,组织学检测软骨陷窝形态规则,Safranin O染色及Ⅱ型胶原免疫组化均有阳性表达,RT-PCR检测Ⅱ型胶原高表达.对照组3的组织块明显收缩,呈褐色,无弹性.对照组4,细胞松散,不能形成Pellet.对照组3和4的各种软骨特异性相关检测均为阴性.结论 细胞间直接接触不能够单独诱导BMSC向软骨分化,不是软骨细胞与BMSC混合共培养中发挥诱导作用的主要因素.
