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shRNA抑制HSF-1表达增强17-aag抗结肠癌疗效的体外实验研究
目的:探讨热休克蛋白HSP90拮抗剂17-烯丙胺基-17-脱甲氧基格尔德霉素(17-aag)对体外结肠癌细胞株SW 1116增值的抑制作用及其作用方式,并分析热休克因子-1(HSF-1)对17-aag诱导凋亡的影响.方法:将不同浓度的17-aag作用于野生型SW1116细胞株24、48、72 h,应用CCK-8法测定各处理组细胞的活性,计算增值抑制效应,应用流式细胞仪(FCM)检测细胞周期变化及细胞凋亡比例.构建针对HSF-1的shRNA质粒,通过瞬转质粒及药物干预的不同将肿瘤细胞分为4组,即HSF-1(-)17-aagG)组、HSF-1(-)17-aag(+)组、HSF-1(+) 17-aag(-)组、HSF-1(+)17-aag(+)组.注:HSF-1(-)代表转染了含目的干扰片段质粒,HSF-1(+)代表转染了空载质粒,17-aag(-)代表未受17-aag干预,17-aag(+)代表受17-aag干预.每组细胞经相应处理后,通过FCM测定各组在处理后的细胞凋亡比例,比较各处理因素对结肠癌细胞株SW1116的杀伤作用.通过Western印迹检测各组中H5P90、HSP70、HSP27的表达量,评价细胞凋亡比例的高低与热休克蛋白的表达量是否有关.结果:17-aag对野生型SW1116细胞增殖具有明显的抑制作用,可诱导G2/M期周期阻滞和细胞凋亡.转染组细胞后,HSF-1(-)17-aag(-)组与HSF-1(+)17-aag(-)组间细胞凋亡比例差异无统计学意义;HSF-1(-)17-aag(+)组较HSF-1(+)17-aag(+)组细胞凋亡比例高,而细胞内HSP90、HSP70、HSP27表达量均较HSF-1(+)17-aag(+)组降低.结论:17-aag可诱导体外结肠癌SW1116细胞发生凋亡和周期阻滞.在干扰HSF-1表达后,17-aag诱导细胞凋亡的作用明显增强.
