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微RNA-490-5p对肠功能紊乱大鼠内脏敏感性的影响
目的 探讨微RNA-490-5p在调控肠功能紊乱大鼠内脏高敏感中的作用.方法 用慢病毒载体系统构建微RNA-490-5p的静默载体,将大鼠分为正常组、腹泻型IBS组、慢病毒空载体组和静默组,其中腹泻型IBS组、慢病毒空载体组和静默组为模型组.实时荧光定量PCR法检测静默效率,通过10％印度墨汁灌胃计算首次黑便排出时间、粪便含水率,引起腹部抬高(或背部拱起)的扩张容量阈值,以不同强度的结肠扩张刺激下大鼠的腹部撤回反射(AWR)评分来判断静默微RNA-490-5p后大鼠内脏的敏感性,以BL-420F生物机能实验系统检测大鼠结肠扩张刺激下腹壁肌电活动和氯化乙酰胆碱刺激下大鼠离体结肠肠管张力的改变.采用t检验比较模型组和正常组间的差异,慢病毒干预后多组间比较采用单因素方差分析,当方差齐时多组间两两比较用小显著差法(LSD),方差不齐时用Games-Howell法.结果 模型组胃肠推进时间和引起腹部抬高(或背部拱起)的扩张容量阈值均低于正常组[(8.54±4.07)h比(12.33±2.23)h,(0.56±0.08) mL比(0.84±0.09) mL],差异均有统计学意义(t=2.62、6.37,P均＜0.05).模型组0.8 mL和1.2 mL0.9％氯化钠溶液扩张刺激时的AWR评分均高于正常组[(3.20±0.56)分比(1.20±0.45)分,(3.73±0.46)分比(2.60±0.55)分],差异均有统计学意义(t=7.20、4.58,P均＜0.01);1.6 mL 0.9％氯化钠溶液扩张刺激时,模型组和正常组AWR评分[(3.93±0.26)分比(3.80±0.45)分]比较差异无统计学意义(P＞0.05).静默微RNA-490-5p后,正常组、腹泻型IBS组、慢病毒空载体组和静默组大鼠胃肠推进时间分别为(11.12±1.01)、(6.23±3.17)、(6.09±2.26)和(12.36±1.97)h,4组比较差异有统计学意义(F=10.55,P＜0.01).给予0.8 mL和1.2 mL0.9％氯化钠溶液扩张刺激时,正常组、腹泻型IBS组、慢病毒空载体组和静默组大鼠腹壁肌电振幅分别为(64.91±10.50)、(101.79±11.73)、(80.49±1.27)、(66.92±3.24) μV和(105.09±2.40)、(131.71±16.74)、(111.00士6.41)、(95.49±4.22) μV,4组比较差异均有统计学意义(F=16.82、9.12,P均＜0.05);静默组和正常组大鼠腹壁肌电振幅比较[(66.92±3.24) μV比(64.91±10.49) μV和(95.49±4.22)μV比(105.09±2.40) μV]差异均无统计学意义(P均＞0.05).1.6 mL0.9％氯化钠溶液扩张刺激时,静默组肌电振幅均低于其他各组,差异有统计学意义(F=11.09,P＜0.01).加入1∶1 000的氯化乙酰胆碱后,正常组、腹泻型IBS、慢病毒空载体组、静默组大鼠结肠张力平均上升幅度分别为0.71±0.21、0.81±0.06、0.88±0.21、0.43±0.07,4组比较差异无统计学意义(F=2.57,P=0.100).结论 肠功能紊乱大鼠存在内脏高敏感,微RNA-490-5p可能参与肠功能紊乱大鼠内脏敏感性的调控.
