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氨基胍减轻高糖培养系膜细胞的肥大程度与降低周期素激酶抑制物p27有关
Wolf等发现无血清高糖培养导致系膜细胞(mesangial cell,MC)停顿于G1[1],MC肥大在糖尿病肾病(DN)肾小球系膜区扩大中起重要作用[2],氨基胍(aminoguanidine,AG)可改善DN早期的肾小球系膜区扩大[3].现已明确细胞是否肥大和周期停顿均由细胞周期调节蛋白(cell cycle regulatory protein,CCRP)控制[4].其中周期素激酶抑制物p27是一种十分重要的CCRP,在DN早期的MC肥大中起重要作用[4,5].本研究旨在观察AG对高糖培养MC肥大程度及MC中p27水平的影响,从而探讨AG的作用机制.一、材料和方法1.细胞培养:SD大鼠MC按谌贻璞等[6]方法培养和鉴定(抗desmin和抗vimetin染色阳性,抗Ⅷ因子染色阴性).MC培养于含10%小牛血清的正常糖(5.56 mmol/L)DMEM中,常规置于37℃、5%的CO2培养箱中孵育,每周传代2次.实验用MC为亚培养6~8代MC.进入实验前行无血清正常糖培养24h,然后分别无血清正常糖(G100组)、高糖(25 mmol/L)(G450组)及高糖+AG(Sigma公司,AG终浓度0.25 mmol/L,溶于无血清高糖DMEM中)(G450+AG组)培养72h;另外,对MC分别转染p27错义(missense)或反义(antisense)寡核苷酸(oligodeoxynucleotide,ODN)后无血清高糖(G450+错义ODN组及G450+反义ODN组)培养72h.