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约氏疟原虫孢子增殖特异18S核糖体DNA部分序列及其检测应用
目的测定约氏疟原虫By265株S型18S rDNA序列,并用于蚊体内疟原虫的分子检测.方法根据伯氏疟原虫S型18S rDNA序列,合成一对保守区引物,从感染约氏疟原虫7 d后的斯氏按蚊中肠组织逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增约氏疟原虫S型18S rRNA片段并测序,据此序列合成约氏疟原虫S型18S rD-NA种型特异引物,与保守的逆转录引物配伍,对感染后1~7 d蚊体内约氏疟原虫S型18S rRNA表达量进行RT-PCR检测.结果扩增的约氏疟原虫S型18S rDNA片段长度为920 bp,与伯氏疟原虫S型和约氏疟原虫A型的同源性分别为95.3%和94.0%.RT-PCR检测结果显示卵囊密度与扩增带强度明显一致,且敏感性高于解剖镜检方法.感染后3 d即可检出蚊体内疟原虫,而此时卵囊在光镜下尚难识别.结论测定了约氏疟原虫S型18S rDNA的部分序列,将其作为分子指标,可早期、敏感、特异和半定量检测蚊体内感染的疟原虫.
关键词: 约氏疟原虫 18S核糖体DNA 检测 逆转录-聚合酶链反应 -
高产DHA海洋真菌Thraustochytrium sp.FJN-10脂肪酸的组型及其18S rDNA序列分析
采用松花粉垂钓法分离到一株Docosahexaenoic acid(DHA)高产菌FJN-10.该菌株长链高度不饱和脂肪酸的组成为DHA(43.2%)和花生酸(17.5%).高密度培养获得33.0 g/L生物量.该菌株生活史中有营养细胞、孢子囊和孢囊胞子.对其18S rRNA基因进行了克隆测序,并登录GenBank(AY773276).依据18S rRNA基因建立的系统进化树分析表明:该菌与Thraustochytrium sp.CHN和Thraustochytrium spMBIC11092具有紧密的亲源关系.