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体外负载HSP70-K-ras突变多肽复合物树突细胞的抗胰腺癌作用
背景:K-ras突变多肽难以很好地被树突细胞(DC)捕获,诱导的抗肿瘤效应有限.目的:探讨热休克蛋白70(HSP70)-K-ras突变多肽复合物体外负载于DC的抗胰腺癌作用.方法:使HSP70与K-ras突变多肽在体外结合成复合物,负载于由人外周血单个核细胞体外诱导分化获得的DC.酶联免疫吸附测定(ELISA)检测DC的细胞因子分泌能力,流式细胞仪分析DC负载抗原前后的细胞表型变化,胆囊收缩素(CCK)-8法检测负载抗原后DC对同基因淋巴细胞的促增殖作用,以及激活的同基因淋巴细胞对人胰腺癌细胞株Patu8988、PANC-1和正常人肝细胞株L-02的细胞毒作用.结果:HSP70-K-ras突变多肽复合物可激活DC,适浓度为0.75 μg/ml,可使DC的白细胞介素(IL)-12、肿瘤坏死因子(TNF)-α分泌量和细胞表面CD80、CD83、CD86、HLA-DR表达率显著增高.0.75 μg复合物可有效激活1×106个DC,刺激1×107个同基因淋巴细胞增殖,特异性杀伤具有相同12位点突变类型(GGT→GTT)的Patu8988细胞,杀伤率达52.9%±5.1%,对不同突变类型的PANC-1细胞(GGT→GAT)和正常人肝细胞杀伤作用不明显.结论:负载HSP70-K-ras突变多肽复合物的DC活性增强,可刺激同基因淋巴细胞产生高效而特异的抗胰腺癌效应.
关键词： HSP70热休克蛋白质类 K-ras突变多肽 树突细胞 胰腺肿瘤 -
负载k-ras抗原的树突状细胞诱导细胞毒性T淋巴细胞对肺癌细胞的体内杀伤作用
目的 观察k-ras突变多肽致敏的树突状细胞(DC)诱导活化的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对肺癌细胞的体内杀伤作用.方法 联合应用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)1000 mg/L和白细胞介素4(IL-4) 500 mg/L诱导外周血DC,分别使用表达k-ras突变体的肺癌细胞抗原、单纯k-ras突变体抗原表位肽和k-ras突变体抗原表位肽阳离子纳米颗粒致敏DC,进而通过诱导刺激T淋巴细胞得到特异性的CTL.分别使用肺癌A549、NCH-446细胞株建立荷瘤裸鼠模型,以评价CTL体内抗肿瘤活性.结果 负载全瘤抗原的DC诱导产生的CTL对表达k-ras阳性(A549)的肺癌细胞具有较好的抑制作用,而对k-ras表达阴性(NCH-446)的肺癌细胞抑制作用与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 负载肿瘤抗原的DC诱导CTL能够显著抑制肿瘤的生长速度,进而提高荷瘤裸鼠的生存时间,表明其可增加特异性抗肿瘤作用.
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树突细胞负载K-ras突变多肽诱导抗胰腺癌免疫反应
背景与目的:由于大多数肿瘤抗原尚未确定,所以肿瘤的免疫治疗还处于临床探索阶段.k-ras原癌基因在胰腺癌中有特异性的表达,突变位点恒定,不失为一个良好的免疫靶位.本研究探讨以k-ras基因为靶点体外诱导胰腺癌被动免疫治疗的可行性,为临床进行胰腺癌个体化治疗提供实验依据.方法:利用RTPCR法扩增k-ras基因,通过流式细胞术检测k-ras癌基因突变类型.合成含突变位点的多肽,负载外周血单核细胞来源的树突细胞(dendritic cell,DC),检测其表达率,对T细胞进行激发活化,MTT法检测肿瘤特异性T细胞对胰腺癌细胞Patu8988的杀伤作用.结果:Patu8988胰腺癌细胞株12位密码子点突变为GGT→GTT,12位氨基酸突变为缬氨酸.合成突变多肽能有效地在树突细胞表达突变位点,激发的肿瘤特异性T细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTLs)能有效地杀伤相应的肿瘤细胞.结论:突变多肽能有效地诱导免疫细胞杀伤含k-ras突变基因的胰腺癌细胞,从而为胰腺癌的免疫治疗提供实验依据.
