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白念珠菌14-α脱甲基酶 K143Q 氨基酸置换与氟康唑耐药形成的相关性研究
目的：研究临床耐氟康唑白念珠菌14-α脱甲基酶的 K143Q 氨基酸置换与氟康唑耐药形成的关系。方法运用体外定点突变技术构建 ERG11基因 A427C 突变型重组质粒，并利用酶切、连接构建 YES2/CT 酵母表达质粒。通过构建成的表达质粒在酿酒酵母中的异源性表达及体外药物敏感性表型的检测，分析其致 K143Q氨基酸置换与白念珠菌对氟康唑产生耐药的关系。结果真菌体外药物敏感性表型检测显示，含氨基酸置换的表达质粒转染于酿酒酵母 INVSc1后，氟康唑低抑菌浓度（MIC）增加16倍。结论K143Q 可增强白念珠菌对氟康唑的耐药性。
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TRPV1通道异源表达体系的建立和功能的初步研究
目的：构建能够表达 TRPV1通道用于实验研究的HEK 293T细胞表达体系。方法采用脂质体转染方式将TRPV1质粒转入人胚胎肾 HEK 293T细胞，建立 TRPV1型通道瞬时异源表达体系，并对转染后的 TRPV1表达体系进行了鉴定，同时对该通道功能特性进行了研究。结果经荧光显微镜观察，转染率可达40%~50%；Western Blot研究发现转染后的 HEK 293T细胞在与 TRPV1通道蛋白相应的位置上具有明显的条带，提示 TRPV1通道蛋白在转染后的细胞中有异源性表达；共聚焦显微成像显示，转染后的 HEK 293T 细胞在受到 TRPV1通道激动剂刺激后，胞内荧光强度明显变强，提示 TRPV1通道介导钙离子功能正常。结论研究结果表明，基于 HEK 293T细胞的 TRPV1通道瞬时转染的异源表达体系成功构建。
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人HCN4基因真核表达质粒构建及在HEK293细胞中的表达
目的：构建人HCN4基因的真核表达质粒并转染人胚胎肾细胞，建立异源性表达HCN4通道模型。方法：通过聚合酶链反应扩增人HCN4基因全长核苷酸序列，双酶切（ XhoI和EcoRI）后插入真核表达质粒pIRES2-EGFP中，构建重组真核表达质粒pIRES2-HCN4-EGFP。应用脂质体法将重组质粒pIRES2-HCN4-EGFP转染入HEK293细胞中进行表达。全细胞膜片钳技术检测HCN4通道电流。结果：酶切及测序的结果显示pIRES2-HCN4-EGFP构建成功，倒置荧光显微镜能观察到EGFP绿色荧光，反转录-聚合酶链反应检测到HCN4 mRNA表达，膜片钳检测到HCN4基因编码的通道电流。结论：成功建立异源性表达HCN4通道模型，为进一步研究HCN4通道电生理特性提供了实验基础。
