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人巨细胞病毒IE1蛋白促进巨噬细胞分泌IL-1β、TNF-α及凋亡
为了研究HCMV IE1-GFP融合蛋白瞬时高表达对巨噬细胞分泌活性及其凋亡的影响,将真核表达载体pEGFP/IE1转染至巨噬细胞(Mψ),转染48 h后,用荧光显微镜观察GFP-IE1融合蛋白或GFP的表达与定位.ELISA法检测细胞培养上清中IL-1β或TNF-α的含量以及用RT-PCR检测其mRNA的表达情况,并收集Mψ经PI染色后流式细胞术(FCM)检测其凋亡率.结果发现,GFP-IE1融合蛋白在Mψ内瞬时表达且定位于细胞核,GFP定位于整个细胞中.GFP-IE1融合蛋白在Mψ内瞬时高表达使Mψ分泌IL-1β和TNF-α量及其mRNA表达量均增加且Mψ凋亡率明显上升,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01),而GFP表达对Mψ分泌及其凋亡无影响(P＞0.05).HCMV IE1瞬时高表达可上调Mψ分泌细胞因子IL-1β和TNF-α并促进Mψ凋亡.
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人巨细胞病毒蛋白IE1及pp65在HEL细胞中表达的时空特性
目的研究HCMV感染HEL细胞后,病毒蛋白IE1及pp65在不同时间点的亚细胞分布及其表达量-时效变化相关性.方法HCMV感染HEL细胞后,吸附2 h,维持培养0、2、4、6、10、22及46 h后,用病毒蛋白IE1的单克隆抗体及蛋白pp65的单克隆抗体做免疫细胞化学染色,检测此两种蛋白的胞内分布;同时运用图像分析系统对此检测结果进行灰度值测定,并利用方差分析分析此测定结果.结果IE1蛋白仅在核内检测到;表达趋势是:4～6 h p.i.呈表达上升趋势,6～8 h p.i.又下降.pp65首先于仅在核内被检测到,之后也分布于胞浆中.pp65表达于2～8 h p.i.表达增多,8～24 h p.i.呈胞内稳定表达,24～48 h p.i.表达降低.结论IE1蛋白及pp65表达的亚细胞分布具有时空特异性;两种蛋白的表达量上都表现为量-时效相关性;本研究间接反映了病毒复制增殖的连续过程.
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人巨细胞病毒IE1蛋白功能研究进展
人巨细胞病毒(HCMV)在人群中多数呈隐性感染,但对免疫功能低下者可引起严重的疾病甚至死亡.HC-MV IE1蛋白为一种多功能调节蛋白,是HCMV感染后表达早且表达量丰富的蛋白,它可影响病毒和细胞启动子的转录活性,调控HCMV基因的时序性表达,并通过参与不同的信号转导通路,在细胞中发挥促进凋亡或抑制凋亡作用,IE1蛋白与HCMV在体内持续性感染以及肿瘤的形成密切相关.
关键词： 人巨细胞病毒(HCMV) IE1蛋白 复制 凋亡
