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pET28a(+)文献资料
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野生型和突变型人白介素13的大肠杆菌表达及活性分析
利用大肠杆菌表达野生型和突变型重组人白介素13(IL-13),以获得具有生物学活性的重组蛋白.采用PCR方法从质粒pET22b-hIL-13上扩增人成熟IL-13的编码序列.用定点突变引物扩增IL-13突变体(IL-13m)编码基因.将IL-13和IL-13m编码基因分别克隆到原核表达载体pET28a(+)中,构建质粒pET28a(+)-IL-13和pET28a(+)-IL-13m,然后将质粒转化到E.coli BL21(DE3)中,构建重组体,IPTG诱导重组蛋白表达.重组蛋白采用镍柱(Ni-NTA)纯化,纯化后复性,并分析其生物学活性.结果成功得到IL-13和IL-13m重组蛋白,经SDS-PAGE分析.在相对分子质量约14.6 kD的位置出现明显蛋白条带,经Western blot证实为重组hIL-13蛋白;重组蛋白主要以包涵体形式存在.纯化复性后,重组蛋白具有生物学活性.后成功获得了具有生物学活性的野生型和突变型重组人IL-13,为后续研究奠定了基础.
