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4IgB7-H3-Del文献资料
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人4IgB7-H3不能形成可溶性形式的分子机制探讨
本文拟通过氨基酸序列比对方法分析序列高度重复的人4IgB7-H3与2IgB7-H3两种异构体的序列差异,并探讨该差异在可溶性形式产生中发挥的机制.运用拼接PCR的方法获得缺失6个保守性氨基酸"PQRSPT"的4IgB7-H3-De1基因,构建重组真核表达载体pIRES2-EGFP/4IgB7-H3-De1,通过脂质体转染法将其导入L929细胞,并经G418抗性筛选和亚克隆.通过RT-PCR、流式细胞术和Western blot检测基因转染细胞B7-H3的表达,采用Western blot和ELISA方法检测细胞培养上清中sB7-H3的表达.本文成功克隆和构建了真核表达载体并获得基因转染细胞株L929/4IgB7-H3-Del,流式细胞术、Western blot和ELISA方法检测结果表明,4IgB7-H3转染细胞表面高表达B7-H3蛋白,细胞培养上清中无sB7-H3蛋白,而4IgB7-H3-Del转染细胞表面高表达B7-H3蛋白,其培养上清中则有大量sB7-H3的存在,提示保守性氨基酸"PQR-SPT"可能是人4IgB7-H3不能形成可溶性形式的重要序列.
关键词： 协同刺激分子 基因转染细胞 4IgB7-H3-Del sB7-H3
