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TNF-α/TNFR信号蛋白在煤工尘肺患者肺泡巨噬细胞中的表达
[目的]研究肺泡巨噬细胞(alveolar macrophage,AM)凋亡信号通路中肿瘤坏死因子α(TNF-α)/肿瘤坏死因子受体(TNFR)信号蛋白的表达水平及其规律,探讨TNF-α/TNFR信号蛋白在煤工尘肺肺纤维化过程中的可能作用.[方法]以尘肺诊断中确定的观察对象(4例)及壹期煤工尘肺(CWP)患者(24例,其中脱尘及未脱尘各12例)为研究对象,收集大容量肺灌洗回收液,经分离、纯化、培养裂解肺泡巨噬细胞,AM用蛋白免疫印迹(Western blotting)检测信号蛋白β-actin、TNF-α、TNFR1、TNFR2、天冬半胱氨酸特异性蛋白酶8(Caspase-8)、天冬半胱氨酸特异性蛋白酶3(Caspase-3)、核因子-κB的受体65/50(NF-κB P65及P50),以β-actin为参比,用FlourChem HD2软件分析各信号蛋白的相对含量. [结果]壹期CWP患者AM表达的TNF-α、TNFR1、Caspase-8、Caspase-3、NF-κB(P65、P50)、TNFR2水平分别为2.69±1.19、1.95±1.02、2.80±1.95、2.19±1.49、2.70±1.30、2.45±1.32、5.15±1.24,高于观察对象中其相应蛋白(分别为0.93±0.14、1.18±0.19、1.24±0.55、1.44±1.08、1.41±0.26、1.35±0.53、1.07±0.08)的表达,差异具有统计学意义(P＜0.05);在未脱尘者中上述指标表达水平分别是3.544±1.278、2.508±0.925、3.274±2.183、3.079±1.304、3.332±1.062、2.865±1.024、5.817±1.089,高于脱尘者中的表达水平(分别为1.899±1.191、1.318±0.538、1.627±0.740、1.764±0.815、2.068±0.708、1.602±0.672、4.483±1.425),差异具有统计学意义(P＜0.05). [结论]CWP患者AM凋亡信号蛋白Caspase-8、Caspase-3、NF-κB(P65、P50)、TNFR、TNF-α的表达水平上升,脱尘后表达水平降低.表明TNF-α/TNFR信号通路在尘肺发病中可能起一定作用.
关键词： 煤工尘肺 肺泡巨噬细胞 TNF-α/TNFR信号通路 信号蛋白表达 -
尘肺患者肺泡巨噬细胞凋亡及其死亡信号调控机制研究
目的 初步研究尘肺患者肺泡巨噬细胞(AM)的凋亡情况以及肿瘤坏死因子-α及其受体(TNF-α/TNFR)信号通路对AM凋亡的调控作用,为尘肺病的早期防治提供依据.方法 选取30例尘肺患者为研究对象,收集其肺泡灌洗回收液,分离纯化AM,将实验分为5组,即未处理组、超氧化物歧化酶(SOD)组、TNF-α/TNFR组、抗-TNF-α组、半胱氨酰天冬氨酸特异蛋白(Caspase)-8抑制剂组.培养24 h后,收获AM,分别用光学显微镜、透射电子显微镜、荧光共聚焦显微镜检测AM凋亡的情况.采用SAS 8.2软件进行方差分析和x2分析.结果 光学显微镜、荧光共聚焦显微镜、透射电镜下均可见凋亡细胞染色质浓缩、边缘化、染色质分割成块状、核膜不完整和凋亡小体等典型的凋亡形态.SOD组、抗-TNF-α组、Caspase-8抑制剂组的AM凋亡指数均低于未处理组.结论 尘肺患者AM存在一定程度的凋亡,表现为形态学的改变,凋亡程度与接尘性质有关,与尘肺期别、接尘工龄、脱尘年限无关.SOD复合酶、抗-TNF-α抗体、Caspase-8抑制剂可在信号通路的不同环节阻断信号转导,抑制AM凋亡的发生.
关键词： 尘肺 肺泡巨噬细胞 凋亡 TNF-α/TNFR信号通路
