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铜诱导人体转铜伴侣蛋白Atox1构象变化的研究
目的探讨铜对Atox1蛋白构象变化的影响. 方法用圆二色性光谱分析了Atox1的构象变化. 结果结合铜以后,Atox1无论是二级结构,还是三级结构都发生了变化,铜诱导的构象变化对于Atox1在体内发挥其作用时可能起关键作用. 结论铜可诱导人体转铜伴侣蛋白Atox1发生构象变化.
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维生素C对大鼠晶状体蛋白二级结构的作用
目的 通过抗氧化离体实验,用经典的抗氧化剂维生素C(VitC),验证抗氧化剂对晶状体蛋白的抗氧化保护作用,并建立体外设计、验证和筛选药物对晶状体抗氧化保护作用的评定指标.方法 15 d龄SD大鼠经皮下注射2 mmol/L亚硒酸钠溶液建立白内障模型,在晶状体蛋白制备过程中,部分样品加入经典的抗氧化剂VitC,测定蛋白含量、分析蛋白多肽成分并检测蛋白圆二色性.结果 在VitC的保护作用下晶状体蛋白的低分子量蛋白的含量明显增加,PAGE电泳中出现多条分子量较低的蛋白条带,但SDS-PAGE的泳带无明显改变,CD谱显示α-螺旋增加和β-折叠减少.结论 VitC对晶状体蛋白具有一定的抗氧化保护作用,初步得出今后在设计、验证和筛选药物对白内障的抗氧化保护作用时可依据的评价指标.
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华支睾吸虫胞浆苹果酸脱氢酶活性位点氨基酸点突变对酶活性和热稳定性影响
目的为了研究华支睾吸虫胞浆苹果酸脱氢酶H195及其周围氨基酸的点突变对酶活性和热稳定性的影响,进一步了解蛋白分子结构与功能的关系.方法利用PCR技术,对胞浆苹果酸脱氢酶H195及其周围氨基酸基因进行点突变,与pQE30质粒连接构建重组质粒,转染大肠杆菌后表达蛋白,测定酶活性和圆二色性,测定不同温度时222 nm圆二色性改变,确定不同点突变蛋白的热稳定性. 结果 H195被异亮氨酸、半胱氨酸和酪氨酸置换后,酶活性下降了100倍以上,但随着H195被不同氨基酸置换和H195周围氨基酸被置换情况的不同,不同突变株表达的蛋白酶活性差别很大,H195/I195和H195/Y195突变株表达的蛋白酶活性明显高于H195N197/I195Y197和H195T198/C195M198突变株表达的蛋白酶活性;H195/Y195突变株表达的蛋白与未突变蛋白的二级结构差异明显;H195/Y195和H195T198/C195M198突变株表达的蛋白热稳定性明显降低,tm值分别为63 .5 ℃和64℃,比Cs-cMDH的tm值分别下降了4 ℃和3.5 ℃.结论活性中心H195的点突变可导致华支睾吸虫胞浆苹果酸脱氢酶活性的明显下降,而且H195被不同的氨基酸置换后可导致酶活性下降程度的不同,H195周围氨基酸被替换成具有形成氢键或二硫键的氨基酸后,导致酶活性下降更为明显;H195及其周围氨基酸的突变可导致蛋白质二级结构的改变和热稳定性的不同程度下降.
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硒性白内障模型与人老年性白内障比较研究
目的比较人老年性白内障和硒性SD大鼠核性白内障,探讨该白内障模型在运用于对人老年性白内障的研究中的可行性,进而初步研究蛋白质变性过程中二级结构的变化.方法 15 d龄SD大鼠,经皮下注射2 mmol·L-1亚硒酸钠溶液建立白内障模型,通过对蛋白含量的测定,蛋白多肽成分的分析以及蛋白圆二色性的检测,对两者进行比较.结果 15 d龄SD大鼠皮下注射2 mmol·L-1亚硒酸钠溶液4 d后晶状体出现明显的乳白色核性混浊;与人老年性白内障晶状体相比较,硒性SD大鼠中LMW的蛋白含量亦明显减少;PAGE电泳中出现与人老年性白内障位置相似的电泳条带,SDS-PAGE中的电泳条带差异较大;其CD谱波形与人晶状体蛋白的波形十分相似.结论硒性SD大鼠白内障模型与人老年性白内障在发生过程中产生了相似的变化,该模型可以应用到人老年性白内障的研究中.并初步探讨人老年性白内障发生过程中蛋白变性过程.
