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Ⅰ型人类免疫缺陷病毒包膜糖蛋白修饰体表达载体的构建及鉴定
目的构建V3环完全或部分缺失的Ⅰ型人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus type Ⅰ,HIV-1)ADA株包膜糖蛋白表达体系.方法分别设计包膜糖蛋白两端及V3环删除区域两端的引物,采用重叠延伸剪接法进行HIV-1 ADA株包膜糖蛋白V3环修饰体的构建.得到的PCR产物经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切,将酶切产物与pSM载体连接,转化大肠埃希菌后筛选阳性克隆,经PCR及基因序列测定进行鉴定.结果获得HIV-1 ADA株包膜糖蛋白V3环修饰体PCR产物,构建了其表达载体pSM-ADA△V3和pSM-ADAmV3,经转化和筛选获得了重组质粒,经PCR及基因测序鉴定显示重组质粒序列正确,为预期目的片段.结论成功构建了V3环修饰的HIV-1 ADA株包膜糖蛋白的表达载体.此结果为进一步构建伪病毒,观察V3环完全或部分缺失对病毒侵入靶细胞过程的影响,为开发阻止HIV-1进入靶细胞的药物或疫苗打下基础.
关键词： HIV-1 HIV包膜蛋白质gp120 修饰 重叠延伸剪接法 -
HIV-1 ADA株gp140真核表达载体的构建与鉴定
目的 构建Ⅰ型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)ADA株包膜蛋白(gp140)真核表达载体.方法 分别设计包膜蛋白和突变点两端的两对引物,采用重叠延伸剪接法,构建HIV-1ADA株包膜蛋白gp140突变体.获得的PCR产物与pMD18-T载体连接,转化大肠杆菌后筛选阳性克隆进行测序,鉴定正确后经EcoRⅠ和NheⅠ双酶切,与pcDNA6/myc-HisA载体连接,构建包膜蛋白gp140的真核表达载体(pcDNA6-ADAgp140),转化大肠杆菌后筛选阳性克隆,经PCR及酶切进行鉴定.结果 获得HIV-1ADAgp140的PCR产物,构建了其真核表达载体pcDNA6-ADAgp140,经转化和筛选获得了重组菌,经PCR、酶切及基因测序结果显示序列正确,为预期目的片段.结论 成功构建了ADAgp140包膜蛋白的真核表达载体.此结果为深入研究HIV包膜蛋白生物学特性及进行HIV疫苗研究提供了良好的物质基础.
关键词： Ⅰ型人类免疫缺陷病毒 gp140 重叠延伸剪接法
