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非肌肉肌球蛋白重链ⅡA(NMHCⅡA)生理病理功能研究进展
非肌肉肌球蛋白重链ⅡA(NMHCⅡA)是Ⅱ型非肌肉肌球蛋白的主要亚型,近年来NMHCⅡA基因及蛋白功能的研究日益增多,引起国內外学者的广泛重视.已证实NMHCⅡA基因突变导致多种遗传性疾病,临床多见巨大血小板减少,并逐渐发展为伴有听力障碍、白內障和肾功能损伤;NMHCⅡA参与胞质分裂、细胞吞噬、细胞运动、血栓形成、炎症、肿瘤转移、視网膜变性、听力、肾脏功能调节等病理生理过程.MYH9不同位点的基因突变,NMHCⅡA蛋白构象的变化,表达量的改变,在细胞内分布的变化,磷酸化的强弱以及其结合蛋白的改变都可能成为影响肿瘤、心血官疾病发生发展的重要机制之一.本文就近年来NMHCⅡA主要生理病理功能做一综述.
关键词： 非肌肉肌球蛋白重链ⅡA 巨血小板减少症 血栓 炎症 肿瘤 -
慢病毒载体介导的shRNA沉默非肌肉肌球蛋白重链ⅡA(MYH9)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)旁分泌的影响
目的 观察慢病毒介导shRNA沉默MYH9是否影响BMSCs的旁分泌功能.方法 将MYH9干扰序列经双酶切后与 pHBLV-U6-ZsGreen-Puro真核载体连接,在脂质体介导下将重组质粒转染293T细胞,包装产生的病毒液感染BMSCs.用荧光显微镜观察荧光蛋白表达;分别用实时荧光定量PCR和蛋白印迹检测MYH9 mRNA及蛋白表达;elisa检测其培养基上清液中VEGF、bFGF、ANG-1和ANG-2的含量.结果 成功构建重组质粒pHBLV-U6-MYH9-ZsGreen-Puro,转染293 T细胞产生高滴度慢病毒,荧光显微镜下可见被慢病毒感染的rBMSCs表达强绿色荧光蛋白,qRT-PCR和western blotting结果显示两条慢病毒感染组MYH9mRNA表达水平明显下调,显著低于对照组和空载组 (P<0.05);沉默MYH9基因后,实验组的ANG-1和bFGF在增殖末期较对照组和空载组有明显上升(P<0.05),ANG-2和VEGF未见明显差异(P>0.05).结论 pHBLV-U6-MYH9-ZsGreen-Puro 慢病毒包装质粒转染BMSCs后,BMSCs旁分泌能力未受明显影响.
关键词： 非肌肉肌球蛋白重链ⅡA 骨髓间充质细胞 慢病毒 旁分泌 -
2型糖尿病肾病患者肾组织中Snail、MYH9的表达及意义
目的：观察锌指转录因子（Snail）、非肌肉肌球蛋白重链ⅡA（MYH9）在2型糖尿病肾病（DN）患者肾活检组织中的表达，探讨DN的发病机制。方法收集DN肾组织标本32例（ DN组）和非DN行肾活检的正常肾组织标本10例（对照组），应用免疫组化法检测两组肾组织中Snail、MYH9的表达。结果 Snail阳性染色见于DN组和对照组肾小管上皮细胞，其相对表达量前者高于后者（P＜0．05）；MYH9阳性染色见于DN组肾小球足细胞和肾小管，对照组未见阳性表达；DN组纤维化的肾小球、肾小管中未见Snail、MYH9阳性表达。结论 Snail、MYH9在DN患者肾组织中表达增加，提示Snail、MYH9可能参与了DN的发生发展过程。
关键词： 糖尿病肾病 锌指转录因子 非肌肉肌球蛋白重链ⅡA 免疫组织化学 -
慢病毒载体介导的 shRNA 沉默非肌肉肌球蛋白重链Ⅱ A 对骨髓间充质干细胞旁分泌的影响
目的：观察慢病毒介导 shRNA 沉默非肌肉球蛋白重链ⅡA（MYH9）对骨髓间充质干细胞（BMSCs）旁分泌功能的影响。方法采用脂质体法将含 MYH9干扰序列的 pHBLV －U6－ZsGreen －Puro（实验组）质粒转染到293T 细胞，以转染 pHBLV －U6－ZsGreen －Puro 空载质粒的细胞为空载组，以正常未转染细胞为对照组，包装产生的病毒液感染 BMSCs。用荧光显微镜观察荧光蛋白表达；以β－actin 为内参，分别用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT －PCR）和免疫印迹（Western blot）检测 MYH9 mRNA 及蛋白表达；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测其培养基上清液中血管内皮生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、促血管生成素1（ANG －1）和促血管生成素2（ANG －2）的含量。结果成功构建重组质粒 pHBLV －U6－MYH9－ZsGreen －Puro，转染293 T 细胞产生高滴度慢病毒，荧光显微镜下可见被慢病毒感染的 rBMSCs 表达强绿色荧光蛋白，qRT －PCR 和 Western blot结果显示2条慢病毒感染 MYH9 mRNA 表达水平明显下调，显著低于对照组和空载组（P ＜0．05）；沉默 MYH9基因后，实验组的 ANG －1和 bFGF 在增殖末期较对照组和空载组有明显上升（P ＜0．05），ANG －2和 VEGF 未见明显差异（P ＞0．05）。结论pHBLV －U6－MYH9－ZsGreen －Puro 慢病毒包装质粒转染 BMSCs 后，BMSCs 旁分泌能力未受明显影响。
关键词： 非肌肉肌球蛋白重链ⅡA 骨髓间充质细胞 慢病毒 旁分泌
