首页 > 文献资料
-
人类VIM基因的克隆和真核表达载体的构建
目的:构建VIM(Vimentin)基因的真核表达载体,以深入研究VIM的功能及其在相关疾病中的作用.方法:从人cDNA文库中,以RT-PCR方法扩增出1401bp的VIM编码区片段,胶回收后连接入T.载体,测序鉴定.再用Hind Ⅲ和BamHI双酶切,将VIM编码区片段定向克隆到真核表达载体pcDNA3.1中,酶切鉴定重组质粒.将重组质粒转染NIH3T3细胞,分别以RT-PCR和Western Blot方法检测VIM的mRNA表达和蛋白表达.结果:将人VIM编码区基因成功克隆到真核表达载体pcDNA3.1中；继而转染NIH3T3细胞后,RT-PCR和Western Blot结果显示细胞可以表达VIM的mRNA和蛋白.结论:成功构建pcDNA3.1-VIM的真核表达载体,为进一步研究VIM基因的功能以及其在相关疾病中的作用奠定了基础.
-
波形蛋白基因的构建、表达及鉴定
文章进行波形蛋白(VIM)基因重组质粒的构建,并进行表达与鉴定,为开辟新的肝癌诊断方法奠定基础.从人宫颈癌细胞( HELA)中提取总RNA并采用PR-PCR及PCR技术克隆VIM基因,经酶切连接等构建带有GST标签的PGEX-4T-1-VIM重组表达质粒,在大肠杆菌DH5α菌中扩增重组质粒,并在BL21菌中进行诱导表达,通过SDS-PAGE及Western blotting等进行鉴定.重组及表达蛋白Vimentin的融合蛋白,为建立一种新的肝癌早期诊断方法奠定基础.
-
某院2011年12月-2012年12月ICU亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶基因型的研究
目的:对重症监护病房(ICU)临床分离的亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌的耐药性及碳青霉烯酶基因型进行研究,为临床防治提供理论依据.方法:收集2011年12月-2012年12月青岛市海慈医疗集团ICU临床分离的亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌65株,采用K-B琼脂纸片扩散法进行药敏试验,聚合酶链反应(PCR)检测OXA-23、OXA-24、OXA-51、OXA-58、IMP、VIM6种碳青霉烯酶基因,并对PCR产物进行测序.结果:65株亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌除对头孢哌酮/舒巴坦、阿米卡星、多黏菌素B的耐药率较低外,对其他药物的耐药率均在90％以上.65株扩增出OXA-51基因,56株扩增出OXA-23基因,6株扩增出VIM基因,检出率分别为100％、86.15％、9.23％,OXA-24、OXA-58及IMP均未检出；PCR产物测序表明与GenBank相关基因同源性为100％.结论:该单位ICU亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌的耐药现象严重；OXA-23型碳青霉烯酶的产生是鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类药物耐药的重要机制之一.
-
青岛地区3家"三甲"医院ICU耐亚胺培南革兰氏阴性杆菌碳青霉烯酶基因型研究
目的:分析青岛地区3家"三甲"医院重症监护病房(ICU)耐亚胺培南革兰氏阴性杆菌碳青霉烯酶的基因型,为临床防控和治疗耐药菌感染提供参考.方法:收集2013年1月-2016年6月青岛地区3家"三甲"综合性医院ICU分离的耐亚胺培南肺炎克雷伯菌(IRKP)、耐亚胺培南铜绿假单胞菌(IRPA)、耐亚胺培南鲍曼不动杆菌(IRAB)各60株,采用纸片扩散法进行药敏试验;采用 Carba NP试验确证其碳青霉烯酶表型;采用聚合酶链反应法扩增其碳青霉烯酶基因,应用双脱氧链终止法进行双向测序,并与 GenBank数据库进行Blast比对.结果:3种耐亚胺培南革兰氏阴性杆菌对哌拉西林、头孢唑林、亚胺培南西司他丁钠、庆大霉素等大部分临床常用抗菌药物的耐药率均较高,但对多黏菌素B敏感(耐药率均为0).180株耐药菌株中,A、B、D类碳青霉烯酶阳性菌株分别有52、13、39株,检出率分别为28. 89％、7. 22％、21. 67％.检出KPC-2、IMP-1、VIM-2、OXA-23基因的分别有52株(IRKP)、4株(IRPA)、8株(IRPA7株、IRAB1株)、39株(IRAB),检出率分别为28. 89％、2. 22％、4. 44％、21. 67％;未检出/MP-2、 VIM-1、NDM-1、OXA-24、OXA-58基因.Blast比对结果显示,上述检出基因与GenBank数据库中的已知基因100％同源.结论:该地区3家"三甲"医院ICU耐亚胺培南革兰氏阴性杆菌的耐药情况严重,对大多数临床常用抗菌药物的敏感度均较低.检出的主要基因型包括KPC-2(肺炎克雷伯菌)、OXA-23(鲍曼不动杆菌)、IMP-1和VIM-2(铜绿假单胞菌).
