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MDM2反义寡核苷酸对血管平滑肌细胞MDM2和p53表达的影响
目的:研究小鼠双微体扩增基因(mouse double minute 2；MDM2)反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide; ASON)对血管平滑肌细胞MDM2和p53表达的影响,探讨MDM2反义寡核苷酸包埋支架防治支架内再狭窄的可行性.方法:人工合成一段针对MDM2 mRNA的反义寡核苷酸,脂质体包裹不同浓度ASON转染兔血管平滑肌细胞,RT-PCR和Western-blotting检测MDM2反义寡核苷酸对兔血管平滑肌细胞MDM2和p53表达的影响.结果:不同浓度MDM2反义寡核苷酸作用于兔血管平滑肌细胞后,MDM2和p53 mRNA表达量各浓度组之间有显著性差异(P＜0.01),MDM2和p53蛋白表达量各浓度组之间有显著性差异(P＜0.01).结论:MDM2反义寡核苷酸体外能够特异性抑制兔血管平滑肌细胞MDM2表达,提高细胞内p53基因表达量,MDM2反义寡核苷酸有望被进一步应用于药洗脱支架研究.
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小鼠双微体扩增基因反义寡核苷酸在血管平滑肌细胞中的摄取动力学研究
目的 研究小鼠双微体扩增基因( mouse double minute 2,mdm2)反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide,ASON)在血管平滑肌细胞中的摄取动力学,探讨mdm2反义寡核苷酸包埋支架防治支架内再狭窄的可行性.方法 人工合成一段针对mdm2 mRNA的反义寡核苷酸,以肼基尼古酰胺(HYNIC)作为双功能螯合剂进行99Tcm标记,以脂质体包裹99Tcm标记的ASON,不同时间检测脂质体包裹的ASON在血管平滑肌细胞中的摄取和清除情况,并与未经脂质体包裹的ASON在平滑肌细胞中的摄取及清除情况比较.结果 ASON的标记率为(52.30±2.03)%,经纯化后放化纯达95%以上.平滑肌细胞对脂质体包裹的ASON的摄取峰值为(48.22±2.39)%,且明显高于未经脂质体包裹的ASON,脂质体包裹的ASON的清除率在各时间点均低于未经脂质体包裹的ASON.结论 mdm2的反义寡核苷酸经脂质体包裹后,平滑肌细胞对反义寡核苷酸能达到较大的摄取比率,清除较缓慢.mdm2反义寡核苷酸有望被进一步应用于药洗脱支架研究.
