首页 > 文献资料
-
κ-卡拉胶酶CgkX催化区的重组表达菌株筛选和发酵优化
目的:CgkX是来自Pseudoalteromonas sp.QY203的一种高活性、高稳定性的κ-卡拉胶酶,本文旨在构建CgkX催化结构域(CgkX-CM)重组表达菌株,并对发酵条件进行优化,提高CgkX-CM的产量.方法:在分析κ-卡拉胶酶CgkX-CM基因序列的基础上,构建多种CgkX-CM表达载体,在大肠杆菌BL21 (DE3)中进行重组表达,通过酶活测定筛选其中产量高的表达菌株,并优化发酵起始pH、诱导温度、IPTG浓度、装液量以及甘氨酸浓度等因素.结果:构建了5种重组表达菌株,其中E.coli BL21(DE3)/pET22b-CgkX-CM酶产量是其他重组菌株的7.4-11.6倍.确定了该菌株佳发酵条件为:培养基含1 g·L-1甘氨酸(起始pH 7.5),装液量为75 mL,0.1 mmol· L-1 IPTG 20℃诱导28 h,酶产量是优化前的7.3倍.结论:经过重组表达载体筛选和发酵优化,CgkX-CM产量大幅度提高,为今后比较CgkX全长及其催化区域的酶学性质,确定C端Big_2结构域对CgkX的作用奠定了基础.
-
κ-卡拉胶酶CgkX高效重组表达菌株的构建和发酵优化
目的 CgkX是1种高活性、高稳定性的κ-卡拉胶酶,但产量低.本文旨在构建多种重组表达菌株,并进行发酵条件优化,以提高κ-卡拉胶酶CgkX的产量.方法 在分析了κ-卡拉胶酶CgkX基因序列中稀有密码子和氨基酸序列中含硫氨基酸的基础上,构建多种CgkX表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行重组表达和酶活测定,筛选其中高效的表达菌株,并对发酵起始pH、诱导温度、IPTG浓度、装液量以及甘氨酸浓度等因素进行优化.结果 构建了4种重组表达载体,转入大肠杆菌BL21 (DE3),发现E.coli BL21(DE3)/pET-22b-CgkX酶产量高,是以前菌株的5.5倍.通过优化确定了佳发酵条件为:发酵起始pH7.5,IPTG浓度为0.05 mmol·L-1,诱导温度20℃,装液量为75 mL,甘氨酸浓度为1g·L-1.优化后酶产量达到32.1 U/mL,是优化前的7.1倍.结论 经过重组表达载体筛选和发酵优化,CgkX产量提高到初的39.1倍,为酶解制备κ-卡拉胶寡糖提供了足量的工具酶.
