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应用凝胶过滤筛选纯化甲型肝炎病毒介质
目的筛选适合甲肝病毒疫苗大规模纯化凝胶过滤层析的介质.方法采用柱层析法,分别以Sepharose 4 FF,Sepharose 6 FF及Sephacryl S-500 HR三种不同的凝胶过滤介质对经过阴离子交换层析纯化的甲肝病毒样品进行纯化.结果三种凝胶介质分离甲肝病毒的图谱不相同,其中以Sepharose 4FF纯化甲肝病毒,抗原回收率达69%,纯化倍数为4.4倍.结论 Sepharose 4FF凝胶过滤层析可以用于甲肝灭活疫苗的大规模纯化.
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阴离子交换色谱纯化甲型肝炎病毒(YN5株)的研究
对阴离子交换色谱纯化HAV的合适条件进行了探索.先使用"试管法"研究DEAE Sepharose Fast Flow凝胶结合HAV及病毒解离的条件,然后分别使用线性阶段洗脱和阶段梯度洗脱在柱色谱上进行了HAV的纯化.结果表明经过阴离子交换色谱纯化得到的病毒保持有抗原性和免疫原性,HAV抗原回收率大于85%,杂蛋白去除率大于80%,纯化的病毒样品中的内毒素与宿主DNA的含量也大大降低,证明阴离子交换色谱可用于HAV疫苗的纯化.
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甲型肝炎病毒Vero细胞适应株的选育研究
将甲肝患者粪便中分离的甲型肝炎病毒在Vero细胞中进行适应性培养,选育高滴度适应株应用于甲肝灭活疫苗研究.在Vero细胞上连续传代,测抗原滴度和感染性滴度,满意后按WHO推荐的甲型肝炎灭活疫苗规程进行灭活疫苗试制研究.经Vero细胞14次适应性传代后,病毒抗原滴度可高达1:2560,感染性滴度为8.23LogC-CID5o/ml.试制的灭活疫苗HPSEC检测在280 nm时仅有一个高峰,SDS-PAGE电泳,在22kD、26kD和33kD处有三条蛋白带,和HAV VP3、VP2和VP1的位置相同.ICR小鼠效力试验表明疫苗剂量1600 EU/ml与Merck疫苗50U效果相似.通过研究获得了Vero细胞甲肝病毒适应株YN5株,初步证明可作为甲型肝炎灭活疫苗的候选毒株.
