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新城疫强毒株F蛋白裂解位点串联基因的构建及其原核表达
目的 构建鸡新城疫(ND)强毒株多裂解位点串联基因表达载体,为建立NDV强弱毒株的ELISA鉴别方法奠定基础.方法 人工合成一段包含4种不同NDV强毒株裂解位点的基因Fe(F protein multitude epi-position),其中各裂解位点之间用Linker(GGGGS)使其串联,然后进行2倍和4倍拷贝,并定向克隆至原核表达质粒pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-28a(+)/2Fe和pET-28a(+)/4Fe,进行表达和Western blot鉴定.结果 构建的原核表达重组质粒pET-28a(+)/2Fe和pET-28a(+)/4Fe测序正确.Western blot检测结果表明,2Fe、4Fe蛋白均与新城疫强毒株F48E9阳性血清呈阳性反应,而与新城疫弱毒株V4阳性血清呈阴性反应.结论 已成功构建NDV强毒株F蛋白裂解位点串联基因表达载体,为建立NDV强弱毒株的ELISA鉴别方法提供理论依据.
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人甲型流感病毒H3N2亚型中和表位串联基因原核表达载体的构建
目的 构建人甲型流感病毒H3N2亚型中和表位串联基因原核表达载体,并在大肠杆菌中表达目的蛋白.方法 合成人甲型流感病毒H3N2亚型中和表位的串联基因,克隆人pET-28a(+)载体中,构建重组表达载体pET-28a-H3,经酶切鉴定和DNA序列分析后,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,并进行ELISA和Western blot鉴定.结果 重组载体pET-28a-H3酶切片段大小和DNA序列分析与预期结果一致.表达的目的蛋白相对分子质量约9 400,与相应的多克隆抗体反应性良好.结论 已成功构建人甲型流感病毒H3N2亚型中和表位串联基因原核表达载体pEW-28a-H3,并表达了目的 蛋白,为制备单克隆和多克隆抗体奠定了基础.
