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胞浆定位文献资料
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CTP-OD-HA融合蛋白的原核表达及其活性鉴定
目的 构建CTP-OD-HA融合基因原核表达质粒,表达并纯化融合蛋白,并检测其在人慢性粒细胞白血病(CML)K562细胞株中的转导活性及胞浆定位.方法 分别将胞浆转导肽(CTP)、寡聚化区域(OD)基因和流感病毒血凝素抗原表位(HA)片段依次连接入pET32a(+)质粒.构建重组原核表达质粒pCTP-OD-HA,转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,经亲和纯化、Western blot验证、肠激酶切割、目的蛋白回收和FITC标记后,将FITC-CT-OD-HA融合蛋白作用于K562细胞,观察其转导活性及细胞定位.结果 重组原核表达质粒pCTP-OD-HA经酶切及测序鉴定,证明构建正确.37℃,1 mmol/LIPTG诱导4 h,目的蛋白的表达量高.约占菌体总蛋白的35%,纯化后纯度达95%以上.FITC-CTP-OD-HA融合蛋白在K562细胞中具有高转导活性和显著的胞浆定位特性.结论 已成功构建CTP-OD-HA融合基因原核表达质粒.并高效表达了目的蛋白,为进一步研究其在CML信号转导通路中的作用,阐明CML的发病机制及探讨蛋白肽在CML中的治疗策略奠定了基础.
