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Twist1蛋白在胃癌组织中的表达及其临床意义
目的:检测Twist1蛋白在胃癌组织中的表达,探讨其在胃癌发生、发展过程中的作用及其临床病理学意义.方法:采用免疫组织化学法检测Twist1蛋白在199例胃癌、25例高级别上皮内瘤变、24例低级别上皮内瘤变、46例肠上皮化生、17例慢性萎缩性胃炎和23例正常胃黏膜组织中的表达水平,分析Twist1蛋白表达与胃癌临床病理学特征之间的关系.结果:Twist1蛋白在胃癌组织中的表达明显高于上皮内瘤变、肠上皮化生、慢性萎缩性胃炎和正常胃黏膜组织,差异有统计学意义(P＜0.001).胃癌组织中Twist1蛋白的表达水平在肿瘤直径≥4 cm组明显高于肿瘤直径＜4cm组(P＜0.01);有淋巴结转移组明显高于无转移组(P＜0.01);死亡组明显高于生存组(P＜0.01).但Twist1蛋白的表达水平与胃癌类型、患者年龄、肿瘤发生部位、T分级、肿瘤分化、临床分期和肿瘤组织学类型无统计学关联(P＞0.05).结论:Twist1蛋白在胃癌组织中高表达,并与肿瘤大小、转移情况和患者预后有关,其可能是胃癌发生的一个重要因素.
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Gli1对人肝癌细胞中Twist1蛋白表达及细胞迁移的影响
目的 探讨Hedgehog信号通路关键蛋白Gli1对人肝癌细胞中Twist1蛋白表达和细胞迁移的影响.方法 应用蛋白免疫印迹技术在Huh7、HepG2、PLC、SMMC-7721、Bel-7404五种人肝癌细胞中筛选Gli1高表达细胞系,根据GenBank数据库设计并合成3条Gli1-siRNA经质粒转染到已筛选出Gli1高表达的人肝癌细胞中,分别为pGCsi-U6-GLi1 siRNA-1(siRNA-1组)、pGCsi-U6-GLi1 siRNA-2(siRNA-2组)、pGCsi-U6-GLi1 siRNA-3(siRNA-3组),而空白对照组(N组)不转染任何序列,阴性对照组转染阴性对照序列(NC组).转染48h后分别使用实时荧光定量PCR和Western blotting法检测各组Gli1mRNA和蛋白表达,筛选出佳siRNA序列.对筛选出的佳siRNA序列组的细胞,采用细胞划痕实验观察其迁移能力,用Western blotting检测该组细胞中Twist1、E-Cadherin蛋白表达.结果 Western blotting检测结果提示,与另外4种人肝癌细胞比较,Bel-7404细胞株中Gli1表达量增加(P均＜0.05);与其他组比较,siRNA-2组中的Gli1表达量低(P均＜0.05);与N组比较,siRNA-2组中的Twist1蛋白表达下调,E-cadherin表达上调,N-Cadherin和Vimentin表达下调,迁移能力下降(P均＜0.05).结论 Gli1可上调肝癌Bel-7404细胞中Twist1蛋白表达,促进入上皮-间质细胞转化及迁移.
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miR-580对乳腺癌细胞系中Twist1的调节作用
目的：探讨miR-580在MCF-10A细胞系中对Twist1的调节。方法：本实验利用生物信息学方法预测Twist1的靶miRNA是miR-580。首先，采用qPCR法检测在MCF-10A系列细胞系中Twist1及miR-580的表达。然后，在MCF-10A细胞系中分别转染miR-580类似物和miR-580抑制物后，利用RT-PCR、Western blot、t检验分析Twist1的表达及细胞迁移能力的变化。后利用荧光素酶实验验证miR-580通过结合在Twist1的3'UTR调节其表达。结果：1)在MCF-10A细胞系中Twist1与miR-580的表达呈负相关；2)在MCF-10A细胞系中转染miR-580类似物后，Twist1的表达下调；在MCF-10A细胞系中转染miR-580抑制物后Twist1的表达上调；3)在MCF-10A细胞系中引入miR-580类似物后细胞迁移能力降低；4)miR-580直接结合在Twist1的3'UTR。结论：miRNA-580在MCF-10A细胞系中通过结合在Twist1的3'UTR负向调节Twist1的表达从而克制细胞的迁移。
