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NBP对器官型脑片糖氧剥夺模型中细胞凋亡的影响
目的 观察正丁基苯酞(NBP)对乳大鼠大脑皮质器官型脑片的氧糖剥夺模型(OGD)中细胞凋亡和线粒体电位的影响.方法 建立SD乳鼠大脑皮质运动区的器官型脑片,SMI-32染色观察锥体细胞.2 w后,随机分为对照组(C组)和实验组(T组),T组在OGD干预30 min后给予不同剂量NBP,分为T0、T001、T01、T1、T10组,给NBP前和后1h观察PI染色;选择T0组、T10组,观察两组在OGD 30 min、NBP 1 h、24h、72 h、7d等不同时间点PI染色变化.于NBP后1h各T组进行JC-1线粒体膜电位检测.结果 器官型脑片OGD 30 min给予NBP 1 h后,C组和各T组PI染色可见不同亮度红色荧光,各T组荧光强度均大于C组,荧光强度与NBP浓度(0～ 10 μmol/L范围内)呈负相关,各T之间组及与C组相比差异有显著性(P＜0.05);T0组和T10组在OGD 30 min均出现明显细胞凋亡,两组无显著性差异.复氧复糖后随时间延长T0组细胞凋亡增加,T10组逐渐减少,差异显著(P＜0.05);C组和各T组JC-1线粒体检测试剂盒染色可见OGD 30 min,复氧复糖1h后,红色荧光/绿色荧光(R/G)的值明显减小,R/G的值与NBP浓度呈正相关,各T组R/G值均小于C组,差异显著(P＜0.05).结论 OGD模型可模拟缺血性脑损伤的病理变化,重复性良好;NBP对缺血性脑损伤导致的急性和迟发性细胞凋亡均具有保护作用;NBP对脑片损伤后线粒体电位的耗散有阻止作用,且与剂量相关.
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PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡的影响因素
目的利用PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡时影响亚二倍体峰位置的因素.方法用地塞米松诱导SD大鼠胸腺淋巴细胞凋亡,采用不同的固定剂、固定温度和时间,在悬浮缓冲液洗涤细胞时悬浮不同的时间,然后进行PI染色流式细胞仪分析.结果 4种不同的固定剂中,只有70%乙醇固定的胸腺淋巴细胞出现亚二倍体峰,而其它3种固定方法无亚二倍体峰出现;乙醇固定的温度以及细胞在悬浮缓冲液悬浮的时间对亚二倍体峰的位置有明显的影响,而固定时间的长短对其影响较小.结论不同的固定剂、固定温度和时间以及细胞在悬浮缓冲液悬浮的时间对PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡的结果均有影响,但如条件掌握得当,PI染色是一种检测细胞凋亡的较好方法,具有简单、直观和可以定量的特点.
