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依达拉奉对脑缺血再灌注大鼠脑红蛋白和14-3-3γ蛋白的影响
目的 探索依达拉奉对脑缺血再灌注大鼠脑红蛋白(Ngb)和14-3-3γ蛋白的影响.方法 采用大脑中动脉闭塞法建立大鼠脑缺血再灌注模型,将48只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和依达拉奉预处理组;采用酶联免疫吸附法检测血清Ngb和14-3-3γ水平,采用蛋白免疫印迹、免疫组化检测脑组织中Ngb和14-3-3γ表达.结果 模型组大脑和血清的Ngb和14-3-3γ水平均高于假手术组(P<0.05),依达拉奉预处理组大脑和血清的Ngb和14-3-3γ水平均高于模型组(P<0.05).结论 依达拉奉能通过上调脑缺血再灌注大鼠血清和脑组织中Ngb和14-3-3γ水平发挥脑保护作用.
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14-3-3γ在人卵巢上皮性癌中的表达检测
目的:检测14-3-3γ在卵巢上皮性癌组织的表达,探讨在卵巢上皮性癌发病机理中14-3-3γ蛋白家族的作用机制.方法:应用实时荧光定量PCR方法检测14-3-3γ在15例正常卵巢组织和52例卵巢上皮性癌组织中的表达差异,应用原位杂交方法检测14-3-3γ mRNA在正常卵巢组织和卵巢上皮性癌组织中的定位.结果:实时荧光定量PCR结果经过Mann-Whitney U检验,表明卵巢癌组的14-3-3γ mRNA水平显著高于正常卵巢组.14-3-3γ mRNA定位于卵巢癌细胞中,在正常卵巢组织中没有明显信号出现.结论:在人上皮性卵巢癌中,14-3-3γ转录上调,14-3-3γ mRNA定位于癌细胞.由此推测,14-3-3γ可能参与了人上皮性卵巢癌的发生.
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重组小鼠脑14-3-3γ蛋白单克隆抗体的制备及鉴定
-3蛋白.结论 重组小鼠脑14-3-3γ蛋白多克隆血清和单克隆抗体成功制备;此可用于神经系统退行性疾病的诊断.
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14-3-3γ蛋白与雷公藤甲素诱导胰腺癌细胞凋亡机制的相关性研究
目的 研究雷公藤甲素(triptolid ,TPL )对人胰腺癌细胞中14-3-3γ蛋白表达的影响,探讨雷公藤甲素诱导胰腺癌细胞凋亡与14-3-3γ蛋白的相关性.方法 ①分别给予6. 25 、12. 5 、25 、50 、100 、150 、200 ng/mL雷公藤甲素诱导24 、48 、72 h后,采用MTT法检测胰腺癌AsPC-1细胞生长率;②给予雷公藤甲素诱导48 h后,采用流式细胞术(FCM )检测胰腺癌AsPC-1细胞凋亡比例;③分别以12.5 、25 、50 ng/mL雷公藤甲素诱导12 、24 、48 、72 h后,采用Western blot检测人胰腺癌AsPC-1细胞14-3-3γ蛋白表达.结果 ①6.25～200 ng/mL雷公藤甲素诱导24 、48 、72 h后,胰腺癌细胞生长率均不同程度地受到抑制(24 h :F＝28. 21 ,P＜ 0.01;48 h :F＝136.00 ,P＜0. 01;72 h :F＝ 282.28 ,P＜0.01);予12.5 ng/mL雷公藤甲素诱导24 、48 、72 h后测得细胞生长率分别为(88. 22 ± 4.73 )%、(43.94 ± 2. 58 )%、(20.84 ± 2. 63)%,差异具有统计学意义(F＝293. 54 ,P＜0.01) .②以0 、6. 25 、12. 5 、25 ng/mL雷公藤甲素作用胰腺癌细胞48 h后,凋亡细胞比例分别为(2. 40 ± 0. 48)%、(15.14 ± 2. 56)%、(29.56 ± 2.73)%、(58. 27 ± 2. 84)%,差异具有统计学意义(F＝309.657 ,P＜0.01);③Western blot检测显示,雷公藤甲素可显著抑制胰腺癌细胞14-3-3γ蛋白表达(x2＝10.769 , P＜0.05);随着作用时间的延长,胰腺癌细胞14-3-3γ蛋白表达逐渐减少(x2＝11.205 ,P＜0.05).结论 雷公藤甲素可显著抑制胰腺癌细胞14-3-3γ蛋白的表达,14-3-3γ蛋白可能在雷公藤甲素诱导人胰腺癌细胞发生凋亡的分子机制中发挥重要作用.
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14-3-3γ过表达通过抑制促凋亡分子Bax转位保护多巴胺能细胞对抗MPP+的毒性作用
目的:探讨14-3-3γ蛋白过表达能否抑制促凋亡分子Bax对抗MPP+对多巴胺能细胞的毒性作用.方法:用腺病毒载体携带人14-3-3γ基因感染PC12细胞,使14-3-3蛋白在细胞中过表达,通过Western Blot检测14-3-3γ、Bax、细胞色素c、caspase 3蛋白质的表达、DAPI染色法检测细胞凋亡、MTT法和自动生化检测法测定细胞活力及LDH酶的活性.结果:14-3-3γ蛋白的过表达能抑制Bax转位到线粒体,抑制LDH的活性(MPP+组41.18±2.71,m14-3-3γ组39.45±3.16,14-3-3γ组13.54±1.82),提高细胞活力(MPP+组49.86±6.27％,m14-3-3γ组52.35±5.59％,14-3-3γ组81.02±5.83％),从而抑制了MPP+诱导的PC12细胞的凋亡(MPP+组49.38±7.31％,m14-3-3γ组46.54±5.49％,14-3-3γ组8.76±3.59％).结论:14-3-3γ蛋白可以通过对促凋亡分子Bax转位的抑制对抗MPP+对PC12细胞的毒性作用,终达到细胞保护作用.
